雙功能分子影像探針標記的內皮祖細胞在腫瘤血管新生中的活體成像.pdf

1、第一部分：
　　目的：探討大鼠骨髓內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)體外分離、培養(yǎng)和擴增的方法，對培養(yǎng)的EPCs進行鑒定。觀察雙功能分子影像探針Conjugate1的細胞標記情況。
　　方法：取大鼠肱骨和股骨骨髓，密度梯度離心法分離單個核細胞，篩選出貼壁細胞，傳代培養(yǎng)。通過分析細胞形態(tài)、細胞表面標志物等方法鑒定EPCs。將新型順磁性/近紅外熒光探針Conjugate1與EPCs在

2、體外共同孵育，觀察探針標記情況。
　　結果：大鼠骨髓懸液分離得到單個核細胞，體外培養(yǎng)后表現(xiàn)出內皮細胞典型的“鋪路石”形態(tài)。細胞傳代四次后能夠內吞乙?；兔芏戎鞍?ac-LDL)、結合凝集素-1(UEA-1)，具有內皮細胞功能。P4代細胞表達EPCs表面標志物CD34、CD133、vWF、VEGFR-2，而成熟內皮細胞表面標志物CD31表達較弱。P4代EPCs能夠較好地吞噬雙功能分子影像探針Conjugate1，探針標記率高達(9

3、6.7±2.6)％。
　　結論：通過密度梯度離心法可以得到具有干細胞特性的大鼠骨髓EPCs，這些EPCs具有分化增殖能力。新型雙功能分子影像探針Conjugate1的EPCs標記率較高。
　　第二部分
　　目的：內皮祖細胞(endothelial progerlitor cells，EPCs)對腫瘤新生血管有重要意義。利用它的歸巢特性，EPCs可被用作腫瘤靶向成像。本實驗使用含有近紅外熒光染料Cy5.5和磁共振T1陽性

4、對比劑Gd的雙功能分子影像探針Conjugate1對荷瘤鼠體內移植的EPCs進行活體示蹤和腫瘤成像，驗證EPCs在腫瘤中的成血管作用，探討EPCs對腫瘤及新生血管生長的作用。
　　方法：分離培養(yǎng)大鼠骨髓EPCs，將標記或未標記Conjugate1的EPCs經(jīng)心臟移植入人乳腺癌MDA-MB-231荷瘤鼠體內。按多個時間點進行活體磁共振成像，通過T1加權像觀察EPCs的歸巢現(xiàn)象，T1 map測算T1弛豫時間，通過T2加權像計算腫瘤體積

5、。按設計的時間點進行活體光學成像，觀察腫瘤信號改變。動物處死后取出腫瘤及肝臟、脾臟、腎臟、肺組織進行離體光學成像，觀察EPCs在各器官的分布情況。通過病理學方法驗證成像結果，觀察EPCs的分化和成血管作用，計算腫瘤微血管密度。使用電感耦合等離子體質譜儀測量以上組織Gd含量。
　　結果：移植Conjugate1標記的EPCs后，磁共振T1加權像可以觀察到腫瘤內不均勻高信號，T1弛豫時間顯著降低。在三周觀測期內，EPCs移植對腫瘤體積