磁探針標記基因修飾的內(nèi)皮祖細胞及體外MR成像研究.pdf

1、第一部分磁性氧化鐵納米顆粒與脂質(zhì)體介導EGFP基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細胞的比較研究目的評價精氨酸包裹的超順磁性氧化鐵納米顆粒(nano-Fe2O3-arginine)及脂質(zhì)體作為基因載體在針對外周血來源的內(nèi)皮祖細胞轉(zhuǎn)染中的可行性，并對兩者的轉(zhuǎn)染效率進行比較。 方法:將nano-Fe2O3-arginine及LipofectamineTM2000作為基因載體連接綠色熒光蛋白pcDNA3.1(+)-myc-HisC/EGFP質(zhì)粒在體外轉(zhuǎn)染兔

2、外周血來源的內(nèi)皮祖細胞，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染結(jié)果并計算轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染后48h采用MTT比色法測定這兩種載體對內(nèi)皮祖細胞增殖和功能的影響以了解其細胞毒性。 結(jié)論:脂質(zhì)體作為載體轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細胞的效率明顯高于精氨酸包裹的超順磁性氧化鐵納米顆粒，脂質(zhì)體可較為有效安全地轉(zhuǎn)染基因至內(nèi)皮祖細胞，從而為內(nèi)皮祖細胞聯(lián)合基因治療疾病奠定了基礎。 第二部分磁探針標記eNoS基因修飾的內(nèi)皮祖細胞及體外MR成像的實驗研究目的heNOS基因體外修飾兔

3、外周血來源的內(nèi)皮祖細胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)后，應用納米磁探針三氧化二鐵(Fe2O3)-精氨酸(arginine)復合物體外標記基因修飾的EPCs，磁共振(MR)進行標記細胞成像。 方法:制備Fe2O3-arginine復合物。分離兔外周血單個核細胞，貼壁法篩選出EPCs，傳代培養(yǎng)，用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000體外轉(zhuǎn)染人內(nèi)皮型一氧化氮合酶(heNOS)基因至EPCs，

4、轉(zhuǎn)染后48h對基因修飾EPCs進行磁探針標記，普魯士藍染色顯示細胞內(nèi)鐵，WesternBlot檢測heNOS基因表達情況，四氮噻唑藍(MTT)比色試驗評價磁探針標記基因修飾EPCs后對細胞生長狀況的影響，流式細胞分析檢測標記、未標記細胞的細胞凋亡，應用MR的T1WI、T2wI、T2*WI三個序列進行細胞群成像。 結(jié)論:使用脂質(zhì)體可以成功地將外源heNOS基因轉(zhuǎn)染進兔外周血EPCs中并在其中有效表達，F(xiàn)e2O3-arginine可