運動訓練動員骨髓內(nèi)皮祖細胞促進缺血下肢血管新生的研究.pdf

1、目的：慢性肢體缺血性疾病發(fā)病率逐年增高，治療困難，尤其對于多節(jié)段動脈硬化性閉塞以及廣泛小動脈閉塞者治療相當棘手。治療性血管新生(therapeutic angiogenesis)為該類疾病提供了新的治療思路。血管內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)的發(fā)現(xiàn)和研究，使人們對血管新生有了新的認識：成年體內(nèi)血管新生除了由已經(jīng)存在的血管通過內(nèi)皮細胞的分化，增生，移行，重塑生成新的毛細血管外，仍然存在由E

2、PCs等前體細胞經(jīng)動員、遷移、增殖及分化而形成毛細血管叢，再經(jīng)血管重塑后形成成熟的血管網(wǎng)的過程。已證實成人骨髓內(nèi)存在EPCs，在血管生長因子等作用下，EPCs能動員入外周血，增殖、分化為血管內(nèi)皮細胞，促進缺血部位的血管新生。 本研究在建立大鼠肢體缺血模型基礎(chǔ)上，探討運動訓煉(exercise training,ET)對外周血EPCs數(shù)量、缺血組織微血管密度(microvessel density,MVD)及血管生長因子表達的影響

3、，證實運動訓練能動員骨髓EPCs入外周血，提高血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的表達，促進缺血組織的血管新生。為臨床治療缺血性疾病提供理論依據(jù)。 方法：雄性Sorague-Dawley大鼠共60只，隨機分為運動組(以下簡稱A組)、非運動組(以下簡稱B組)和假手術(shù)組(以下簡稱C組)，每組各為20只。A組和B組分別采用結(jié)扎股總及股深動脈、切除大部分股淺動脈建立肢體缺血模型，C組僅作皮膚切開縫合。動物模

4、型建立1周后A組大鼠放入運動訓練器中跑30分鐘(10轉(zhuǎn)/分種)，并以此運動量為準，每天一次，B、C組保持日?；顒印游锬Ｐ徒?jīng)跑步訓練一周后分別取A、B、C組大鼠各10只，心臟無菌采血3ml，分離采集外周血單個核細胞，細胞培養(yǎng)4d，對貼壁細胞進行免疫化學鑒定及細胞計數(shù)。運動訓練4周后處死大鼠，取大鼠大腿內(nèi)收肌組織塊固定，免疫組織化學法檢測缺血組織微血管密度(MVD)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的表達情

5、況，采用SPSS統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果： 1、體外培養(yǎng)的EPCs呈紡錘形，貼壁生長，CD133、VWF表達陽性。A組外周血培養(yǎng)的EPCs平均為14.18±2.60/HPF， B組為5.59±1.34/HPF，A組高于B組，二者有顯著性差異(P<0.01)。 2、A、B兩組缺血患肢組織新生毛細血管均增加，A組MVD：39.94±4.01/HPF， B組27.23±3.64/HPF，A組高于B組，二者有顯著性差

6、異(P<0.01)； 3、缺血組織VEGF、bFGF表達均增強，A組(VEGF：3.3±0.67)、B組(2.3±0.67)，A組高于B組，二者相比有顯著性差異(P<0.01)；bFGF：A組(3.1±0.73)，B組2.4±0.84，A組高于B組，二者有顯著性差異(P<0.01)。4、B組的外周血EPCs、組織MVD、VEGF、bFGF均明顯高于C組(P<0.01)，A、B、C三組之間存在顯著性差異(P<0.01)。