肺炎鏈球菌耐藥克隆在抗生素選擇壓力下的適應(yīng)性.pdf

1、背景：
　　 肺炎鏈球菌是臨床重要病原菌之一,近年來(lái),在肺炎鏈球菌對(duì)青霉素、大環(huán)內(nèi)酯類等藥物耐藥性普遍上升的同時(shí),上海地區(qū)研究發(fā)現(xiàn)Taiwan19F-14等國(guó)際耐藥克隆株的流行是肺炎鏈球菌耐藥性上升的重要原因。
　　 目的：
　　 探索肺炎鏈球菌適應(yīng)性評(píng)價(jià)的方法,初步比較肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆株和非流行耐藥株在無(wú)抗菌藥選擇壓力和存在抗菌藥選擇壓力下的適應(yīng)性,探討肺炎鏈球菌耐藥性增長(zhǎng)和國(guó)際耐藥克隆株流行增多的原因。

2、
　　 方法：
　　 1.菌落計(jì)數(shù)法和分光光度法測(cè)定肺炎鏈球菌生長(zhǎng)曲線和殺菌曲線的比較:選用肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆Taiwan19F-14、Spain23F-1菌株各一株和肺炎鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49619,通過(guò)分光光度法和菌落計(jì)數(shù)法分別測(cè)定細(xì)菌在不加抗生素和加入抗生素的不同生長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)液的OD600值和菌落濃度,描繪生長(zhǎng)曲線和殺菌曲線。采用修正的Gompertz方程擬合細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線并計(jì)算生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù),對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)方

3、法所繪制的生長(zhǎng)曲線和殺菌曲線進(jìn)行比較。
　　 2.肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆菌株和非流行耐藥株在無(wú)抗菌藥選擇壓力下適應(yīng)性的比較和分析:選取上海地區(qū)常見的肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆株(Taiwan19F-14,Spain23F-1,Spain6B-2,Taiwan23F-15)及非流行耐藥株,使用心腦浸出液作為培養(yǎng)基。采用分光光度法制作肺炎鏈球菌生長(zhǎng)曲線,采用修正的Gompertz方程擬合細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線并計(jì)算生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù),比較國(guó)際耐藥克

4、隆菌株和非流行耐約株之間及不同的國(guó)際耐藥克隆菌株之間在無(wú)抗菌藥選擇壓力下的適應(yīng)性差異。
　　 3.肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆菌株和非流行耐藥株在抗菌藥選擇壓力下適應(yīng)性的比較與分析:以阿莫西林、頭孢克洛2個(gè)治療社區(qū)呼吸道感染的常用藥物作為研究藥物。選用上海地區(qū)常見的肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆菌株(Spain23F-1,Taiwan19F-14,Spain6B-2,Taiwan23F-15)及非流行耐藥株,采用菌落計(jì)數(shù)法制作阿莫西林和頭孢克

5、洛對(duì)肺炎鏈球菌的殺菌曲線。通過(guò)比較殺菌曲線中達(dá)到99.9％殺菌牢的時(shí)間和抗生素濃度,評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌在該濃度抗生素選擇壓力下的適應(yīng)性差異。通過(guò)計(jì)算亞抑菌濃度抗生素曲線的世代時(shí)間,比較肺炎鏈球菌在亞抑菌濃度抗生素選擇壓力下的適應(yīng)性。綜合以上情況分析國(guó)際耐藥克隆和非流行耐藥株之間及國(guó)際耐藥克隆株之間在阿莫西林、頭孢克洛選擇壓力下的適應(yīng)性差異。探討阿莫西林和頭孢克洛對(duì)國(guó)際耐藥克隆不同的選擇壓力。
　　 結(jié)果：
　　 1.菌落計(jì)數(shù)

6、法和分光光度法測(cè)定肺炎鏈球菌生長(zhǎng)曲線和殺菌曲線比較:在肺炎鏈球菌生長(zhǎng)曲線的對(duì)數(shù)期,菌液的OD600值和菌落濃度之間有很好的相關(guān)性,并確定了兩者的函數(shù)關(guān)系,其中Taiwan19F-14為Y=2.0242X+6.7640,相關(guān)系數(shù)R2=0.6961,顯著性檢驗(yàn)結(jié)果(F=16.036,P=0.005＜0.05);Spain23F-1為Y=1.5789X+6.7021,相關(guān)系數(shù)R2=0.7700,顯著性檢驗(yàn)結(jié)果(F=26.780,P=0.001

7、＜0.05),回歸方程均有顯著性意義。分光光度法擬合的1/2MIC,1MIC藥物濃度殺菌曲線與對(duì)照曲線相比無(wú)明顯下降趨勢(shì),計(jì)算得到的1/2MIC和1MIC藥物濃度的世代時(shí)間與對(duì)照曲線世代時(shí)間的比值要明顯小于菌落計(jì)數(shù)法。分光光度法測(cè)定的RF1C(1.5897)＜菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定的RF1C(3.9894),分光光度法測(cè)定的RF1/2C(1.0685)＜菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定的RF1/2C(1.7721),分光光度法測(cè)定的RF1A(0.9943)＜菌落

8、計(jì)數(shù)法測(cè)定的RF1A(2.1798),分光光度法測(cè)定的RF1/2A(0.9915)≈菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定殺菌曲線的RF1/2A(0.9094)。分光光度法所測(cè)定殺菌曲線中達(dá)到99.9％殺菌率的2MIC濃度曲線,基本與x軸相重合。
　　 2.肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆菌株和非流行耐藥株在無(wú)抗菌藥選擇壓力下適應(yīng)性的比較和分析:國(guó)際耐藥克隆株世代時(shí)間的平均值(0.2867h)較非流行耐藥株(0.3122h)短。4個(gè)耐藥克隆菌株間的世代時(shí)間比較,

9、Taiwan19F-14、Taiwan23F-15、Spain23F-1相似并明顯短于Spain6B-2,分別為0.2834h、0.2760h、0.2689h、0.3923h。耐藥克隆復(fù)合體中世代時(shí)問(wèn)的比較,dlvTaiwan19F-14(0.2488h)＜slvTaiwan19F-14(0.2775h)＜Taiwan19F-14(0.2962h),slvSpain23F-1(0.2662h)＜Spain23F-1(0.2717h)。<

10、br>　　 3.肺炎鏈球菌國(guó)際耐藥克隆菌株和非流行耐藥株在抗菌藥選擇壓力下適應(yīng)性的比較與分析:國(guó)際耐藥克隆菌株對(duì)照曲線的世代時(shí)間平均值(0.1797h)小于非流行耐藥株(0.1920h)。在2MIC濃度下,阿莫西林和頭孢克洛對(duì)非流行耐藥株的殺菌效果較國(guó)際耐藥克隆強(qiáng)。比較不同菌株在1/2MIC亞抑菌濃度選擇壓力下的世代時(shí)間,所有國(guó)際耐藥克隆菌株的G1/2A(0.2413h)＞非流行耐藥株的G1/2A(0.2280h),其中Taiwan1

11、9F-14耐藥克隆菌株的G1/2A(0.2470h)＞非流行耐藥株的G1/2A。所有國(guó)際耐藥克隆菌株的G1/2c(0.2416h)＜非流行耐藥株的G1/2C(0.2698h),其中Taiwan19F-14耐藥克隆菌株的G1/2C(0.2651h)＜非流行耐藥株的G1/2C。
　　 阿莫西林對(duì)Spain23F-1耐藥克隆菌株的殺菌效果優(yōu)于對(duì)slvSpain23F-1耐藥克降菌株,而頭孢克洛對(duì)兩者殺菌效果相仿。Spain23F-1耐

12、藥克隆菌株的G(0.1816h)＞slvSpain23F-1耐藥克降菌株的G(0.1681h),Spain23F-1耐藥克隆菌株的G1/2C(0.2765h)＞slvSpain23F-1耐藥克隆菌株的G1/2C(0.1880h),Spain23F-1耐藥克隆菌株的G1/2A(0.2411h)＞slvSpain23F-1耐藥克隆菌株的G1/2A(0.1778h)。藥阿莫西林和頭孢克洛對(duì)Spain6B-2、Taiwan23F-15耐藥克隆菌

13、株和非流行耐藥株的殺菌效果相近。阿莫西林對(duì)Taiwan19F-14和Spain23F-1耐藥克隆菌株的殺菌效果強(qiáng)于頭孢克洛。計(jì)算國(guó)際耐藥克隆菌株和非流行耐藥株的G1/2,所有國(guó)際耐藥克隆菌株的G1/2C(0.2416h)≈G1/2A(0.2413h),非流行耐藥株的G1/2C(0.2698h)＞G1/2A(0.2280h),Taiwan19F-14耐藥克隆菌株的G1/2c(0.2651h)＞G1/2A(0.2470h),Spain23F

14、-1耐藥克隆菌株的G1/2C(0.2322h)＞G1/2A(0.2094h)。
　　 結(jié)論：
　　 1.分光光度法和菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定的肺炎鏈球菌生長(zhǎng)曲線的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期部分,經(jīng)線性回歸兩者有很好的相關(guān)性。故分光光度法作為測(cè)定肺炎鏈球菌生長(zhǎng)曲線、計(jì)算生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的實(shí)驗(yàn)方法,與菌落計(jì)數(shù)法比較結(jié)果一致,且更為簡(jiǎn)便,可以替代后者用于評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌在無(wú)抗菌藥選擇壓力下的適應(yīng)性。分光光度法測(cè)定肺炎鏈球菌殺菌曲線,無(wú)法真實(shí)反映殺菌效果,隨

15、藥物濃度增加殺菌曲線無(wú)明顯下降趨勢(shì)。故分光光度法作為測(cè)定肺炎鏈球菌殺菌曲線、評(píng)價(jià)殺菌效果的實(shí)驗(yàn)方法,無(wú)法替代菌落計(jì)數(shù)法評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌在抗菌藥選擇壓力下的適應(yīng)性。
　　 2.在無(wú)抗菌藥選擇壓力時(shí)和頭孢克洛1/2MIC、2MIC濃度和阿莫西林2MIC濃度的情況下,國(guó)際耐藥克隆菌株的適應(yīng)性可能較非流行耐藥株高。在阿莫西林1/2MIC亞抑菌濃度情況下,非流行耐藥株適應(yīng)性可能較國(guó)際耐藥克隆高。在無(wú)抗菌藥選擇壓力時(shí),Taiwan19F-14

16、、Taiwan23F-15和Spain23F-1耐藥克隆菌株的適應(yīng)性相似都高于Spain6B-2耐藥克隆。
　　 3.頭孢克洛2MIC濃度對(duì)國(guó)際耐藥克隆菌株的選擇壓力較阿莫西林2MIC濃度大,阿莫西林1/2MIC亞抑菌濃度對(duì)國(guó)際耐藥克隆菌株的選擇壓力較頭孢克洛1/2MIC亞抑菌濃度大。因此,不同品種和濃度的抗生素可能對(duì)國(guó)際耐藥克隆菌株和非流行耐藥株有不同的選擇壓力。
　　 4.在無(wú)抗菌藥選擇壓力時(shí),適應(yīng)性dlvTaiwa