豬鏈球菌2型對(duì)氟喹諾酮類抗生素耐藥性機(jī)制研究.pdf

1、豬鏈球菌病是當(dāng)今世界養(yǎng)豬業(yè)的主要細(xì)菌傳染病之一。最普遍的致病性血清型是2型，能引起豬的敗血癥、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、肺炎等，感染人類會(huì)引起敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎，嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致死亡。氟喹諾酮類藥物是臨床上廣泛應(yīng)用于治療細(xì)菌感染的一類高效、廣譜的人工化學(xué)合成藥物，也是豬鏈球菌病的有效治療藥物之一，但是由于人醫(yī)和獸醫(yī)在臨床上長期廣泛使用以及不合理應(yīng)用，其耐藥性也隨之產(chǎn)生并且逐漸增強(qiáng)。
　　 豬鏈球菌2型(SS2)對(duì)氟喹諾酮類

2、藥物的耐藥機(jī)制很少有報(bào)道。為了探討SS2耐氟喹諾酮類藥物的機(jī)制，本研究對(duì)4株對(duì)諾氟沙星和恩諾沙星敏感的SS2進(jìn)行諾氟沙星和恩諾沙星的耐藥誘導(dǎo)，通過體外耐藥誘導(dǎo)，將諾氟沙星和恩諾沙星的MIC提高至256μg/mL。通過研究親本株和各自誘導(dǎo)至高度耐藥菌株的DNA旋轉(zhuǎn)酶(gyrA)和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ(parC)的氟喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(QRDR)氨基酸變異情況、耐藥菌株外排泵檢測(cè)、耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)和消除、耐藥質(zhì)粒能否接合轉(zhuǎn)移到大腸桿菌等方面探討S

3、S2耐氟喹諾酮類藥物的機(jī)制。本試驗(yàn)還研究了耐不同氟喹諾酮類藥物的SS2是否有交叉耐藥性以及SS2在獲得耐藥性以后，其毒力和致病性是否會(huì)發(fā)生改變，為防治SS2提供理論依據(jù)。
　　 利用PCR方法從15株臨床分離的豬鏈球菌菌株中擴(kuò)增出6株為SS2，占分離總菌數(shù)的40％。通過微量稀釋法測(cè)定了恩諾沙星和諾氟沙星對(duì)6株菌株的MIC，結(jié)果有4株對(duì)這兩種藥物敏感，2株耐藥。
　　 采用體外遞增藥物濃度的方法對(duì)4株敏感株分別進(jìn)行人工誘導(dǎo)

4、產(chǎn)生恩諾沙星和諾氟沙星的耐藥性，結(jié)果成功誘導(dǎo)出高度耐藥菌株8株，兩種藥物對(duì)各自所誘導(dǎo)出來的菌株MIC為256μ g/mL。
　　 應(yīng)用PCR方法對(duì)SS2敏感株和耐藥株的gyrA和parC基因QRDR進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)75％的人工誘導(dǎo)耐藥菌株(6/8)在parC的QRDR發(fā)生E83的突變，其他位點(diǎn)無共同性變化；在gyrA中，氨基酸的變化也無共同性，說明本試驗(yàn)誘導(dǎo)的耐藥菌株，其藥物作用靶基因的靶位突變不是細(xì)菌高度耐藥的主要

5、原因。
　　 檢測(cè)耐藥菌株質(zhì)粒存在后，進(jìn)行耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移和消除試驗(yàn)。耐藥質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)結(jié)果顯示，大腸桿菌DH5。沒有獲得SS2的耐氟喹諾酮類藥物質(zhì)粒；應(yīng)用SDS.溫度交替法對(duì)耐藥菌株進(jìn)行質(zhì)粒消除后，耐藥菌株對(duì)恩諾沙星和諾氟沙星的敏感性均有顯著增加，對(duì)耐藥質(zhì)粒消除試驗(yàn)后的菌株進(jìn)行質(zhì)粒的提取，發(fā)現(xiàn)耐藥菌株的質(zhì)粒片段均有丟失。
　　 耐藥菌株的交叉耐藥性試驗(yàn)結(jié)果表明耐不同氟喹諾酮類藥物的SS2之間存在著氟喹諾酮類藥物的交