復雜基質中氟喹諾酮類抗生素的微萃取技術研究及應用.pdf

1、氟喹諾酮類抗生素(Fluoroquinolones，F(xiàn)Qs)是一種被廣泛用人類和畜牧養(yǎng)殖中的光譜抗菌藥，通過抑制細菌的DNA解旋酶從而對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌都有較強的抑制作用。他們有一個共同4-羰基-1，4-二氫喹啉的骨架，3、6和7位的羧基吡啶環(huán)，哌嗪基和氟原子構成了氟喹諾酮的藥效基團。氟喹諾酮類抗生素在人類疾病及畜牧養(yǎng)殖中的大量應用而導致的細菌耐藥性增高的風險威脅著人類的健康。隨著氟喹諾酮類抗生素在畜牧和水產養(yǎng)殖中的過量使用，

2、在多種環(huán)境基質中都已經檢測出此類抗生素的殘留，尤其在動物源食品（牛奶、蛋類和蜂蜜），生物液體樣品（血樣和尿樣）和肉類（魚肉、雞肉、豬肉和牛肉）中。因此，建立一種靈敏、適用范圍廣的檢測動物源食品、生物液體樣品、肉類和動物飼料中氟喹諾酮類抗生素殘留的新方法就顯得尤為急切。
　　在這里，我們建立了一系列的基于新型萃取裝置與相分離的超聲輔助/磁力攪拌輔助及鹽誘導的及磁力納米Fe3O4顆粒固相微萃取技術結合高效液相色譜儀來檢測動物源食品、生

3、物液體樣品及肉類中五種氟喹諾酮類抗生素（氟羅沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星）的檢測技術。
　　具體研究內容如下:
　　第一部分:我們建立了一個新型的萃取裝置使萃取時能夠達到有機相與水相徹底分離的目的，結合磁力攪拌輔助和鹽誘導的液液微萃取技術用高效液相色譜法檢測動物源食品中的五種氟喹諾酮類抗生素的含量。這種聚乙二醇材料制成的由三個簡單部分新型萃取裝置可以在萃取過程中使萃取劑和水相完全分離從而避免萃取劑重新溶解到水

4、相中去。最佳萃取萃取條件由中心實驗設計來確定:萃取劑體積791μL，鹽Na2SO4重量為2.5 g，pH值1.7，磁力攪拌時間3.0分鐘和離心時間5.5分鐘?；诖朔N萃取條件，方法的相關系數(shù)為0.9989-0.9998，5種氟喹諾酮類抗生素在牛奶、蛋類和蜂蜜中的檢出限范圍是0.07-0.53μg kg-1，定量限為0.25-500μg kg-1。我們檢測了連續(xù)6次回收率數(shù)據(jù)，結果日內相對標準偏差(RSD)為0.65％-5.28％和日間相

5、對標準偏差為2.05％-5.99％。在牛奶中的加標回收率為92.1-102.3％，蛋類中92.2-105.0％，在蜂蜜中的加標回收率為91.6-104.0％。總之，此種方法具有廉價、檢測靈敏度高和易于和高效色譜儀等聯(lián)用的特點。因此，這種方法非常適合于檢測動物源食品中痕量氟喹諾酮抗生素的前處理方法。
　　第二部分:我們建立了一個結合萃取裝置使萃取時能夠達到有機相與水相徹底分離的目的，結合超聲輔助和鹽誘導的液液微萃取技術用高效液相色譜

6、法檢測生物液體樣品中的五種氟喹諾酮類抗生素的含量。最佳萃取萃取條件由中心實驗設計來確定:萃取劑體積945μL，pH值1.7，萃取時間3.0分鐘，鹽Na2SO4的重量為5.9 g和離心時間4.0分鐘?；诖朔N萃取條件，方法的相關系數(shù)為0.9991-0.9998，5種氟喹諾酮類抗生素在血漿和尿樣中的檢出限(S/N=3)范圍為氟羅沙星0.12-0.66μg L-1。定量限為0.5-500μg L-1。我們在三個加樣濃度做連續(xù)6次回收率實驗，相

7、對標準偏差(RSD)分別為日內0.89-5.02％和日間1.86-6.52％。在三個加標濃度下（5，10和20μg L-1）血漿中5種氟喹諾酮類抗生素的回收率為92.6-108.8％，尿樣中的回收率為92.8-110.9％。此種方法具有很多優(yōu)點，比如:經濟實惠、檢測靈敏度高，高萃取效率，萃取時間短和易于和高效色譜儀聯(lián)用等。因此，這種方法非常適合于檢測血漿和尿樣等生物液體樣品中痕量氟喹諾酮抗生素的前處理方法。
　　第三部分:我們建立

8、了一個通過制備新型的納米磁性nFe3O4@SiO2萃取材料的固相萃取技術與高效液相色譜法聯(lián)用檢測動物肉類食品中的五種氟喹諾酮類抗生素的含量。最佳萃取萃取條件同樣由基于響應面法的中心實驗設計來確定:萃取劑體積589μL，pH值2.1，合成時間8.2小時，磁性納米材料的重量為410 mg?；诖朔N萃取條件，方法的相關系數(shù)為0.9980-0.9998，5種氟喹諾酮類抗生素在魚、雞、豬和牛這四種肉樣中的檢出限分別為氟羅沙星0.11-0.15μg

9、 kg-1，氧氟沙星0.32-0.47μg kg-1，諾氟沙星0.45-0.64μg kg-1，環(huán)丙沙星0.16-0.20μg kg-1和恩諾沙星0.06-0.08μg kg-1。定量限為氟羅沙星和恩諾沙星0.50-250μg kg-1，氧氟沙星和諾氟沙星為1.50-500μg kg-1和環(huán)丙沙星1.00-250μg kg-1。連續(xù)6次的日內和日間回收率的檢測結果顯示，相對標準偏差(RSD)分別為日內1.14％-6.45％和日間1.80