粘質(zhì)沙雷菌耐藥性及其對(duì)碳毒霉烯類(lèi)抗生素耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 為了了解臨床分離粘質(zhì)沙雷菌的耐藥現(xiàn)狀，及其對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥特性和耐藥機(jī)制，本研究第一部分對(duì)溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2004年至2010年臨床分離粘質(zhì)沙雷菌的臨床分布和耐藥性進(jìn)行分析和統(tǒng)計(jì)，通過(guò)了解粘質(zhì)沙雷菌的臨床感染現(xiàn)狀、耐藥情況和耐藥特點(diǎn)，為臨床治療和醫(yī)院內(nèi)感染的監(jiān)控提供依據(jù)。第二部分收集、篩選碳青霉烯類(lèi)耐藥菌株，通過(guò)對(duì)主動(dòng)外排系統(tǒng)、外膜蛋白、碳青霉烯酶檢測(cè)等手段研究粘質(zhì)沙雷菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥機(jī)制，

2、分析耐藥性與不同耐藥機(jī)制間的關(guān)系，以了解本地區(qū)臨床分離粘質(zhì)沙雷菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)耐藥的主要機(jī)制，為控制耐藥性的播散提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1．回顧性調(diào)查2004年1月～2010年10月間溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床分離109株粘質(zhì)沙雷菌的分布情況，分析其對(duì)頭孢他啶、環(huán)丙沙星、阿米卡星、亞胺培南、美羅培南等抗菌藥物的耐藥性。
　　 2．收集溫州地區(qū)不同醫(yī)院保存并存活的碳青霉烯類(lèi)耐藥粘質(zhì)沙雷菌21株，用瓊脂二倍稀釋

3、法測(cè)定其對(duì)亞胺培南、美羅培南和厄他培南的最低抑制濃度(MIC)。
　　 3．主動(dòng)外排機(jī)制檢測(cè)：相同條件下檢測(cè)并觀察含與不含5μg/mlCCCP條件下菌株對(duì)亞胺培南、美羅培南和厄他培南的MIC值的變化，PCR法檢測(cè)粘質(zhì)沙雷菌外排泵編碼基因acrA、acrB、MexB、MexR。
　　 4．外膜蛋白檢測(cè)：對(duì)11株亞胺培南耐藥株提取細(xì)菌外膜蛋白后做SDS-PAGE電泳，以2株亞胺培南敏感株作對(duì)照檢測(cè)，檢測(cè)有無(wú)外膜蛋白條帶缺失。

4、
　　 5．碳青霉烯酶檢測(cè)：改良Hodge試驗(yàn)和科瑪嘉KPC顯色培養(yǎng)基篩選KPC酶；PCR法擴(kuò)增KPC、VIM、IMP、SPM-1、NDM-1、SME等碳青霉烯酶基因，并對(duì)PCR法擴(kuò)增陽(yáng)性株測(cè)序確定基因亞型。
　　 6．以7株含KPC基因的粘質(zhì)沙雷菌作為供體菌，大腸埃希菌EC600為受體菌進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)，檢測(cè)中KPC基因的可轉(zhuǎn)移性。
　　 結(jié)果:
　　 1.2004年1月～2010年10月從溫州醫(yī)學(xué)院附

5、屬第一醫(yī)院臨床送檢標(biāo)本中共分離到非重復(fù)粘質(zhì)沙雷菌109株，以痰液標(biāo)本來(lái)源最多，占73.4％(80/109)，其次為尿液12.8％(14/109)、血液6.4％(7/109)、導(dǎo)管2.8％(3/109)和創(chuàng)面1.8％(2/109);標(biāo)本來(lái)源科室分布不一，109株粘質(zhì)沙雷茵主要來(lái)源于監(jiān)護(hù)病房(ICU)37株(33.9％)、外科36株(33．O％)、燒傷科8株(7.3％)、神內(nèi)科4株(3.7％)，呼吸科4株(3.7％)，占總分離菌株的81.7

6、％，存在較明顯的病區(qū)集中趨勢(shì)，
　　 2．臨床常用抗菌藥物敏感性試驗(yàn)表明：粘質(zhì)沙雷菌對(duì)環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明的敏感性最高，為96.6％；其次為丁胺卡那霉素（敏感率95.7％）和左旋氧氟沙星（敏感率95.4％）；對(duì)呋喃妥因的耐藥率最高為95.3％。值得注意的是，我院臨床分離粘質(zhì)沙雷菌對(duì)亞胺培南、美羅培南、厄他培南這三種碳青霉烯類(lèi)抗生素均有較高的耐藥率，分別是5.5％(6/109)，4.6％(5/109)和11.0％(12/109)。

7、
　　 3.21株碳青霉烯類(lèi)耐藥粘質(zhì)沙雷菌中有9株外排泵表型試驗(yàn)陽(yáng)性，以亞胺培南、美羅培南、厄他培南作為底物，分別有5株、1株、5株菌在5μg/mlCCCP的條件下MIC值降低3倍或3倍以上，其中有2株菌同時(shí)對(duì)兩種不同藥物有明顯的外排作用，外排泵對(duì)多種抗菌藥物都有影響，但對(duì)不同抗菌藥物的影響存在差異；CCCP在體外能不同程度地提高粘質(zhì)沙雷菌對(duì)多種抗菌藥物的敏感性，尤其對(duì)亞胺培南和厄他培南的敏感率分別提高了9.2％和4.2％；外排

8、泵編碼基因acrA、acrB、MexB、MexR的PCR擴(kuò)增均陰性。
　　 4.11株亞胺培南耐藥株以2株亞胺培南敏感株作對(duì)照檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)明顯的外膜蛋白條帶缺失。
　　 5.21株碳青霉烯類(lèi)耐藥株中，改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性14株（檢出率66.6％），科瑪嘉KPC顯色陽(yáng)性19株（檢出率90.5％），PCR方法11株檢測(cè)KPC基因（檢出率52.4％）；有3株產(chǎn)IMP型金屬β-內(nèi)酰胺酶（檢出率14.3％）；有2株細(xì)菌產(chǎn)VIM型

9、會(huì)屬β-內(nèi)酰胺酶（檢出率9.5％）：未檢出NDM-1、SPM-1、SME等耐藥基因。
　　 6.7株含KPC基因的粘質(zhì)沙雷菌接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)全部接合成功，提示KPC基因可以通過(guò)接合轉(zhuǎn)移的方式在不同種屬細(xì)菌間傳播。
　　 結(jié)論:
　　 1．臨床分離的粘質(zhì)沙雷菌對(duì)抗菌藥物的總體敏感性較好，但出現(xiàn)較高比例的碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥株，值得關(guān)注。
　　 2．產(chǎn)碳青霉烯酶和主動(dòng)外排是本地區(qū)粘質(zhì)沙雷菌耐碳青霉烯類(lèi)藥物的主要機(jī)