土壤耐藥性及抗生素對土壤氮素影響研究.pdf

1、本文以不同環(huán)境土壤抗生素的耐藥性及抗生素污染對土壤氮素轉(zhuǎn)化的影響為目的，綜合運用傳統(tǒng)的微生物生態(tài)學(xué)方法以及分子生物學(xué)研究手段，并借鑒臨床醫(yī)學(xué)方法，研究茶園、養(yǎng)殖場、醫(yī)院和森林等四種環(huán)境中土壤抗生素抗性基因的存在及豐度特征，篩選高抗生素耐藥菌，探明耐藥菌中抗性基因的遺傳位置;同時研究外源抗生素添加對土壤氮轉(zhuǎn)化及相關(guān)微生物的響應(yīng)，初步研究了土壤環(huán)境條件與土壤耐藥性及養(yǎng)分轉(zhuǎn)化之間的內(nèi)在聯(lián)系。主要研究結(jié)果如下:
　　1.四類土壤環(huán)境中，養(yǎng)

2、殖場土壤中抗生素抗性基因(AGRs)含量較高，是耐藥基因的一個重要存儲庫，而森林土壤受到人為影響最小，各基因拷貝數(shù)較低。茶園土壤中耐藥基因雖然絕對拷貝數(shù)較低，但是相對表達量較高。可見，耐藥基因的積累受人類活動的影響。四類土壤環(huán)境中均檢測到了一類整合子，含量達到4.75×105～1.39×107 copies/g;二類整合子在茶園、養(yǎng)殖場、豬糞中存在，但拷貝數(shù)低于一類整合子。說明整合子廣泛存在于土壤環(huán)境中，耐藥基因在環(huán)境中有較高的基因轉(zhuǎn)移

3、水平。
　　2.不同環(huán)境土壤存在不同程度的耐青霉素和四環(huán)素細菌，其中四類土壤均能篩選出超級青霉素耐藥菌，耐受濃度高達1000 mg/L。所分離純化的20株耐藥菌屬于Pseudomonas sp.或Variovorax sp.。多重耐藥表明每個菌株至少對兩種抗生素存在抗性，但是所有菌株均對四環(huán)素類抗生素敏感。基因檢測表明所有分離的高耐藥菌不僅含有青霉素抗性基因blaTEM，而且含有編碼四環(huán)素外排泵基因tet(C)，說明基因的存在并不

4、一定能夠表達，基因存在只能說明這種基因具有表達的潛能。質(zhì)粒去除后，有6株耐藥菌消除了對大環(huán)內(nèi)脂類抗生素的抗性，說明這些菌株的部分耐藥基因是存在于質(zhì)粒上的，易于橫向轉(zhuǎn)移。
　　3.外源添加抗生素處理初期能使土壤中硝態(tài)氮含量增加，后慢慢平衡。土壤NH4+-N的含量在培養(yǎng)9d顯著下降，后趨于平衡;土壤在高濃度抗生素處理下，AOA呈平緩下降的趨勢，而低濃度抗生素處理下AOA呈先抑制再激活后平緩下降趨勢，總體培養(yǎng)前期與氨氮硝氮變化相呼應(yīng)。因