中期保存角膜遠(yuǎn)程投送的實(shí)驗(yàn)與臨床研究及在野戰(zhàn)眼庫(kù)技術(shù)構(gòu)建中的應(yīng)用.pdf

1、中期保存角膜遠(yuǎn)程投送的實(shí)驗(yàn)與臨床研究及在野戰(zhàn)眼庫(kù)技術(shù)構(gòu)建中的應(yīng)用穿透性角膜移植(PKP)在現(xiàn)代化戰(zhàn)爭(zhēng)眼外傷的救治中具有重要的戰(zhàn)略意義，這對(duì)戰(zhàn)爭(zhēng)時(shí)期我軍眼庫(kù)的儲(chǔ)備能力和機(jī)動(dòng)投送能力提出了更高的要求，需要用野戰(zhàn)眼庫(kù)的構(gòu)建設(shè)想來(lái)解決。本研究應(yīng)用國(guó)內(nèi)自主研發(fā)的Dx中期保存液作為保存及運(yùn)輸介質(zhì)，觀察運(yùn)輸對(duì)眼庫(kù)角膜內(nèi)皮細(xì)胞(CEC)活性的影響，旨在為野戰(zhàn)眼庫(kù)構(gòu)建提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)室研究部分采用搖床模擬運(yùn)輸過(guò)程中的振動(dòng)刺激，對(duì)中期保存的兔角膜施與不同時(shí)間

2、和強(qiáng)度的機(jī)械振動(dòng)，應(yīng)用錐藍(lán)一茜素紅活性染色、酶組織化學(xué)染色及透射電鏡檢查等手段對(duì)模擬運(yùn)輸后CEC活性進(jìn)行檢測(cè)，并通過(guò)動(dòng)物活體移植了解投送后角膜行PKP術(shù)后CEC的活性情況；臨床部分回顧性研究DX中期保存液保存角膜行PKP術(shù)臨床病例資料，探討遠(yuǎn)程運(yùn)送對(duì)PKP術(shù)后效果和角膜內(nèi)皮質(zhì)量是否存在影響。研究表明，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)條件下一定范圍(有效溫度2-6℃，5h持續(xù)加速度1.7m/s<'2>)內(nèi)的機(jī)械振動(dòng)對(duì)DX保存角膜內(nèi)皮CEC活性無(wú)明顯影響，DX 中

3、期保存液應(yīng)用于臨床PKP術(shù)有較高的成功率，可作為一種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、安全有效的角膜保存運(yùn)輸介質(zhì)，符合構(gòu)建野戰(zhàn)眼庫(kù)的諸要素，能夠以此為基礎(chǔ)構(gòu)建滿足戰(zhàn)時(shí)及平時(shí)雙重需要的野戰(zhàn)眼庫(kù)。 目的和意義： 1.檢驗(yàn)角膜DX中期保存液保存效果及遠(yuǎn)程投送后應(yīng)用于角膜移植術(shù)的可行性及效果。 2.探討實(shí)驗(yàn)室模擬運(yùn)輸條件下不同時(shí)間及不同強(qiáng)度的機(jī)械振動(dòng)對(duì)中期保存兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響。 3.了解上述模擬運(yùn)輸條件下中期保存的兔角膜用于P

4、KP術(shù)的效果以及PKP術(shù)后CEC 的存活情況。 4.對(duì)角膜DX中期保存液保存后行遠(yuǎn)程投送并應(yīng)用于PKP術(shù)的臨床資料進(jìn)行回顧性研究，對(duì)同一眼庫(kù)取材保存，本地移植病例及投送至異地移植病例的臨床效果進(jìn)行對(duì)比分析，了解遠(yuǎn)程投送對(duì)PKP成功率的影響。 5. 以實(shí)驗(yàn)室及臨床研究結(jié)果為基礎(chǔ)，為野戰(zhàn)眼庫(kù)技術(shù)能在平戰(zhàn)時(shí)角膜盲治療中的成功應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)，構(gòu)建滿足平、戰(zhàn)時(shí)雙重需要的戰(zhàn)略角膜儲(chǔ)備庫(kù)。 方法： 1.新西蘭大

5、白兔角膜片36枚，中期保存液保存7天，以實(shí)驗(yàn)室用搖床模擬運(yùn)輸狀態(tài)。空白對(duì)照組6枚角膜(4℃冰箱保存后直接染色觀察)，余角膜分為2種情況：①以最大設(shè)計(jì)機(jī)械振動(dòng)強(qiáng)度為定量分組(每組6枚角膜)：按照模擬遠(yuǎn)程投送時(shí)間1、3、5小時(shí)分為3組：②以最大作用時(shí)間為定量分組：按機(jī)械振動(dòng)強(qiáng)度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)分為3組。各組均行錐蘭聯(lián)合茜素紅細(xì)胞活性染色計(jì)算角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度、活性率、六角形細(xì)胞率等；Na<'+>-K<'+>ATP 酶及琥珀酸脫氫酶酶組織化學(xué)染色，

6、圖像分析系統(tǒng)分析計(jì)算各組內(nèi)皮細(xì)胞兩種酶平均積分光密度值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；對(duì)振動(dòng)強(qiáng)度最大、時(shí)間最長(zhǎng)組角膜行透射電鏡觀察，并與對(duì)照組相比較，觀察模擬投送是否引起角膜內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。 2.健康成年新西蘭大白兔27只，其中9只(18枚角膜)作為角膜供體，18只作為角膜受體。DX中期保存液保存供體角膜7天，按方法1分組(每組3枚角膜)模擬運(yùn)輸。角膜移植手術(shù)：將不同模擬分組的角膜片進(jìn)行穿透性角膜移植動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。PKP術(shù)后的處理及觀察：每

7、曰肉眼觀察植片變化，記錄角膜透明度、水腫消退時(shí)間等，第3、7、10、14、21、30天裂隙燈檢查并照相，A超測(cè)量角膜厚度。術(shù)后第30天全部處死，取植片進(jìn)行錐蘭.茜素紅聯(lián)合染色觀察CEC活性。觀察項(xiàng)目：CEC活性密度、活性率、六角形細(xì)胞率等。 3.臨床研究采用山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院眼科研究所所屬青島眼科醫(yī)院、山東省眼科醫(yī)院(濟(jì)南)相關(guān)病例資料，將2006年DX中期保存液保存角膜行穿透性角膜移植術(shù)病例資料按供體角膜是否行遠(yuǎn)程投送分為兩組，

8、對(duì)手術(shù)效果包括術(shù)后植片透明度、最佳矯正視力及角膜內(nèi)皮數(shù)量、質(zhì)量如角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度(CD)、細(xì)胞面積變異系數(shù)(CV)和平均細(xì)胞面積等指標(biāo)進(jìn)行研究，探討遠(yuǎn)程運(yùn)送對(duì)PKP術(shù)后效果和角膜內(nèi)皮質(zhì)量是否存在影響。 4.根據(jù)現(xiàn)代化高科技戰(zhàn)爭(zhēng)的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)出符合標(biāo)準(zhǔn)的機(jī)動(dòng)性高、戰(zhàn)略儲(chǔ)備功能完善、方法簡(jiǎn)便為目標(biāo)的角膜保存程序、保存設(shè)備以及投送方式，從而構(gòu)建滿足和平、戰(zhàn)時(shí)雙重需要的野戰(zhàn)眼庫(kù)。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)室模擬運(yùn)輸狀態(tài)下，運(yùn)輸時(shí)間

9、、運(yùn)輸強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)對(duì)運(yùn)輸效果無(wú)明顯影響，對(duì)照組及各實(shí)驗(yàn)組均保持較高CEC存活率(超過(guò)97％)，細(xì)胞形態(tài)基本正常，兩種酶在各組角膜內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)無(wú)明顯差異，透射電鏡觀察可見(jiàn)投送組與對(duì)照組角膜內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)、無(wú)脫落，細(xì)胞連接緊密，細(xì)胞器豐富。 2.實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)模擬運(yùn)輸后的兔角膜行PKP術(shù)，術(shù)后觀察各組植片厚度均逐漸減小，術(shù)后30天時(shí)植片均透明。植片活性染色均可見(jiàn)活性CEC存在。各組PKP術(shù)后的植片透明率、厚度以及存活CEC數(shù)量與對(duì)照組

10、CEC活性染色結(jié)果無(wú)明顯差異。 3.臨床資料研究結(jié)果表明，在經(jīng)DX中期保存液保存的供體角膜，無(wú)論是在青島當(dāng)?shù)匾嗷蜃郧鄭u運(yùn)送至濟(jì)南，其手術(shù)成功率與遠(yuǎn)程投送無(wú)明顯關(guān)系，對(duì)角膜移植后恢復(fù)等均無(wú)明顯影響。 4.經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床資料研究表明，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)條件下一定范圍內(nèi)的機(jī)械振動(dòng)對(duì) DX保存角膜內(nèi)皮CEC活性無(wú)明顯影響，DX中期保存液應(yīng)用于臨床PKP術(shù)有較高的成功率，可作為一種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、安全有效的角膜保存運(yùn)輸介質(zhì)，符合構(gòu)建野戰(zhàn)眼庫(kù)的

11、諸要素，能夠以此為基礎(chǔ)構(gòu)建滿足戰(zhàn)時(shí)及和平時(shí)期雙重需要的野戰(zhàn)眼庫(kù)。 結(jié)論： 1.實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果表明，用搖床模擬遠(yuǎn)程運(yùn)輸狀態(tài)，可作為角膜遠(yuǎn)程投送模型構(gòu)建的參考方法。一定范圍內(nèi)的機(jī)械振動(dòng)強(qiáng)度及振動(dòng)時(shí)間對(duì)DX中期保存液保存兔角膜CEC活性無(wú)明顯影響。 2.動(dòng)物模型結(jié)果表明，DX中期保存液保存角膜經(jīng)模擬遠(yuǎn)程運(yùn)輸后應(yīng)用于PKP術(shù)，對(duì)PKP術(shù)成功率無(wú)明顯影響。 3.臨床研究表明，DX液作為保存介質(zhì)行角膜保存及遠(yuǎn)程投送可