共刺激分子4-1BB-4-1BBL在系統性紅斑狼瘡T淋巴細胞激活中的作用.pdf

1、本文通過對4-1BB在SLE患者T淋巴細胞的表達的系列研究，明確4-1BB/4-1BBL通路在系統性紅斑狼瘡T細胞激活中的作用，進一步探討系統性紅斑狼瘡的發(fā)病機制。 研究方法： 1、選擇系統性紅斑狼瘡患者40例及正常對照者20例，采空腹靜脈血提取淋巴細胞，同時應用抗CD3單抗刺激T細胞活化，懸浮于10％胎牛血清的RPMI-1640中培養(yǎng)48小時，應用流式細胞術檢測淋巴細胞活化前后CD4<'+>T細胞和CD8<'+>T細胞

2、上4-1BB的表達。 2、將30例狼瘡患者及20例正常對照者靜脈血中分離的淋巴細胞培養(yǎng)于10％胎牛血清的RPMI-1640中，并將其分為正常對照組、單純培養(yǎng)組、抗CD3單抗刺激活化組、抗4-1BB單抗阻斷組、地塞米松組。培養(yǎng)48小時后收集各組淋巴細胞培養(yǎng)的上清液，應用ELISA方法檢測各組培養(yǎng)上清液中T淋巴細胞分泌的IFN-γ和IL-4水平。并且應用MTT法檢測T淋巴細胞增殖狀態(tài)。 3、收集上述培養(yǎng)48小時的細胞，應用R

3、T-PCR方法檢測各組淋巴細胞p38MAPKmRNA和NF-KB mRNA的表達，應用Western blot方法檢測各組淋巴細胞p-p38MAPK及NF-KB蛋白的表達。 4、統計學分析：數據以均數±標準差表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗或u檢驗，不同指標之間進行相關分析。數據用SPSS12.0統計軟件處理。 研究結果： 1、SLE患者T淋巴細胞活化前CD4<'+>T細胞和CD8<'+>T細胞上4-1BB的表

4、達均明顯高于正常對照組(P<0.01，P<0.01)，應用抗CD3單抗刺激活化后CD4<'+>T細胞和CD8<'+>T細胞上表達的4-1BB明顯增加，與活化前比較有顯著差異(P<0.01)。狼瘡患者T淋巴細胞活化前后CD4<'+>T細胞上4-1BB的表達均高于CD8<'+>T細胞上4-1BB的表達(P(0.01，P(0.01)。T淋巴細胞活化前后4-1BB<'+>CD4<'+>T細胞百分數均與免疫球蛋白(IgG)和尿微量白蛋白(MA)呈

5、顯著的正相關關系(r=0.623，P(0.01，r=0.407，P<0.01，r=0.605，P(0.01，r=0.463，P<0.01)。 2、SLE患者應用抗CD3單抗刺激活化后T淋巴細胞的增殖明顯高于單純培養(yǎng)組(P<0.01)，然而應用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后T淋巴細胞增殖明顯受抑制，與活化組比較有統計學差異(P<0.01)，地塞米松處理組T淋巴細胞的增殖也明顯受抑制(P(0.01)。 3

6、、SLE患者T淋巴細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-4的水平明顯高于正常對照組(P<0.05，P(0.05)，而且應用抗CD3單抗刺激活化后，T淋巴細胞分泌的IFN-γ和IL-4顯著高于單純培養(yǎng)組(P<0.01，P(0.01)，但是應用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后T淋巴細胞分泌的IFN-γ和IL-4明顯受抑制(P(0.01，P<0.01)，尤其對IL-4水平的影響最為顯著，抑制水平達到50％以上。 4、SL

7、E患者T淋巴細胞NF-KB mRNA和p38 MAPKmRNA明顯高于正常對照組(P<0.01，P<0.01)，而且SLE活化組T淋巴細胞NF-KB mRNA和p38MAPK mRNA的表達顯著高于單純培養(yǎng)組((P<0.01，P<0.01))，但是應用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后明顯降低p3814APKmRNA的表達(P(0.01)，但是對NF-KB mRNA的表達無影響(P>0.05)。 5、SLE患者T

8、淋巴細胞NF-KB蛋白和p-p38MAPK蛋白的表達均明顯高于正常對照組(P<0.01，P<0.01)，而且T淋巴細胞活化后NF-KB蛋白和p-p38MAPK蛋白的表達水平進一步升高(P<0.01，P<0.01)。應用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后可降低p-p38MAPK蛋白的表達(P(0.01)，但對NF-KB蛋白的表達無影響(P>0.05)。 研究結論： 1、系統性紅斑狼瘡患者淋巴細胞活化前后CD

9、4<'+>T細胞和CD8<'+>T細胞上4-1BB的表達增高。 2、應用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后，T淋巴細胞的活化與增殖受到抑制，并且明顯抑制Th1/Th2細胞因子的分泌。 3、阻斷4-1BB/4-1BBL通路后可使p38MAPK的信號轉導通路明顯受到抑制，但是對NF-KB轉錄因子的活化無明顯影響。 4、上述結論使我們發(fā)現共刺激分子4-1BB在系統性紅斑狼瘡T淋巴細胞活化中的重要作用，為