B淋巴細(xì)胞激活因子表達(dá)水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡關(guān)系研究.pdf

1、[目的]建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RFQ-PCR)檢測(cè)人B淋巴細(xì)胞激活因子(BLyS)mRNA含量的方法。從mRNA和蛋白水平，調(diào)查系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者BLyS表達(dá)水平。初步探討B(tài)LyS在SLE的診斷、病情活動(dòng)等方面的價(jià)值。 [方法]在BLyS基因的高度保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針，RT-PCR擴(kuò)增目的片段，通過(guò)T-A克隆法構(gòu)建BLyS定量標(biāo)準(zhǔn)品；采用RFQ-PCR法實(shí)時(shí)檢測(cè)樣品中相應(yīng)基因產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品建立

2、的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由軟件自動(dòng)計(jì)算出待測(cè)樣本中BLySmRNA準(zhǔn)確含量，并以BLySmRNA和內(nèi)參p2MmRNA含量的比值作為評(píng)價(jià)BLyS表達(dá)水平的指標(biāo)。以新建RFQ-PCR法檢測(cè)定SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中BLySmRNA含量，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清BlyS蛋白水平。采用速率散射比濁法測(cè)定血清IgG水平。46研究對(duì)象分為SLE患者組和健康對(duì)照組，患者組又分為活動(dòng)期組和緩解期組。 [結(jié)果]RFQ-PCR法檢測(cè)BLySm

3、RNA含量的線性范圍為109pp．/mi～101pg/ml，批內(nèi)和批間變異系數(shù)(cv)分別為2．40％～7．36％和4．26％～12．26％。SLE患者BLySmRNA表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組(138+0.35/0.83+0.12,p<0.01)。SLE患者BlyS蛋白水平高于健康對(duì)照組，且活動(dòng)期高于緩解期(P<0.05)，抗dsDNA抗體滴度升高組高于抗dsDNA抗體滴度正常組(P

4、緩解期SLE患者組和健康對(duì)照組(P<0.05)。血清BLyS與抗dsDNA抗體滴度之間有明顯相關(guān)性(r=0.872，P<0.05)。PBMC中BlySmRNA含量與血清IgG水平和抗ds-DNA抗體滴度之間也有明顯相關(guān)性。(r分別為0.442和0.733，P<0.05)。 [結(jié)論]本項(xiàng)研究所建立的BLySmRNA含量RFQ-PCR檢測(cè)方法具有較好的檢測(cè)靈敏度和重復(fù)性。SLE患者BLySmRNA和蛋白表達(dá)水平均增高，其增高程度與疾