PIP-,2-與hKcnq1-Kcne1通道作用亞基及區(qū)域的研究.pdf

1、目的：研究PIP2與hKcnq1/Kcne1通道相互作用的可能亞基及區(qū)域，為分析PIP2對(duì)該通道的調(diào)節(jié)機(jī)制打下基礎(chǔ)。方法①以HEK293細(xì)胞為表達(dá)系統(tǒng)，分別進(jìn)行hKCNQl、hKCNE1共表達(dá)及hKCNQ1單獨(dú)表達(dá)，以全細(xì)胞記錄模式記錄，并比較通道在相同條件下的電流密度、電壓依賴性等電生理參數(shù)，分析hKCNE1的表達(dá)與否對(duì)于PIP2的調(diào)節(jié)作用的影響情況。②根據(jù)hKCNQ2與hKCNQ1的結(jié)構(gòu)同源性及PIP2對(duì)其調(diào)節(jié)效應(yīng)的差異，對(duì)二通道進(jìn)

2、行C-端Helix B以后氨基酸片段的置換，即構(gòu)建蛋白的嵌合體Q1ctQ2與Q2ctQ1，進(jìn)一步分析具體的PIP2的作用區(qū)域。結(jié)果在相關(guān)質(zhì)粒瞬時(shí)表達(dá)于HEK293細(xì)胞36小時(shí)后，在全細(xì)胞記錄模式下，hKcnq1/Kcne1通道對(duì)照組的在60mV刺激電壓下的電流密度I60為84.1±15.2 pA/pF，其半數(shù)激活電壓V0.5為16.1±3.5 mV（n=12）；hKcnq1/Kcne1通道加PIP2組（5μM）電流密度I60為200.5

3、±2.6pA/pF，其半數(shù)激活電壓V0.5明顯左移為4.0±4.2mV（n=3），*P<0.05。hKcnq1通道對(duì)照組的電流密度I60為11.9±2.1 pA/pF，其半數(shù)激活電壓V0.5為3.5±4.1 mV（n=9）；hKcnq1通道加PIP2（5μM）電流密度I60為24.9±3.8 pA/pF，其半數(shù)激活電壓V0.5明顯左移為-7.2±0.7 mV（n=4），*P<0.05?？梢奾Kcne1的存在與否并沒有影響PIP2對(duì)通道的

4、調(diào)節(jié)效應(yīng)。Q1ctQ2通道對(duì)照組的電流密度I60為5.2±0.9 pA/pf，其半數(shù)激活電壓V0.5為23.3±8.9 mV（n=6）；Q1ctQ2通道加PIP2組（5μM）電流密度I60為11.2±2.2 pA/pF，其半數(shù)激活電壓V0.5明顯左移為6.6±4.4 mV（n=5），*P<0.05。Q2ctQ1通道對(duì)照組的電流密度I60為21.7±4.2 pA/pf，其半數(shù)激活電壓V0.5為-37.55±3.5 mV（n=9）；Q2ct

5、Q1通道加PIP2組（15μM）電流密度I60為89.0±15.8 pA/pF，其半數(shù)激活電壓V0.5為-40.2±1.8mV（n=3），相對(duì)于對(duì)照組V0.5并沒有明顯變化。顯示Helix B之后氨基酸片段的相互置換并沒有影響PIP2對(duì)各自通道的調(diào)節(jié)效應(yīng)結(jié)論①PIP2與hKcnq1/Kcne1通道之間的調(diào)節(jié)作用并不需要hKcne1亞單位；②PIP2與hKenq1/Kcne1通道之間的作用關(guān)鍵位置可能位于hKcnq1亞基Helix B之前