5-FU干擾下膜聯(lián)蛋白-Ⅱ、VEGF在HepG2肝癌細胞系中的表達及意義.pdf

1、目的:
　　 原發(fā)性肝癌是病死率很高的惡性消化道腫瘤之一，我國肝癌死亡人數(shù)居世界之首，其中約90％為肝細胞性肝癌（hepatocellular carcinoma HCC），其治療效果差和死亡率高的關(guān)鍵因素就是肝癌細胞的高侵襲轉(zhuǎn)移能力。目前，腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移分子學(xué)機制是腫瘤治療學(xué)研究的焦點之一，腫瘤新生血管的生成、細胞外基質(zhì)的降解及細胞粘附等是目前研究比較深入的主要機制。已有研究證實，膜聯(lián)蛋白家族（Annexin，ANXA）及

2、血管內(nèi)皮細胞生長因子（Vascular endothelial growth factor VEGF）在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移機制中發(fā)揮重要作用，但其具體作用機制及兩者在機制中的相互作用尚不清楚。ANXA2是ANXA家族中的重要成員，其在諸多腫瘤（大腸癌、肺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌、白血病、多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌、甲狀腺癌）的侵襲轉(zhuǎn)移機制中發(fā)揮重要作用，目前關(guān)于ANXA2在肝癌中表達的研究甚少。VEGF是體內(nèi)最強的一種血管生成因子，直接參與誘導(dǎo)

3、腫瘤血管生成，已有研究證實VEGF及其受體VEGFR在肝癌組織較正常肝組織表達明顯增強，在肝癌的生長、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)中發(fā)揮重要作用。本研究通過對不同劑量5-氟尿嘧啶(5-FU)干預(yù)下，ANXA2、VEGF在HepG2肝癌細胞系中表達的情況及HepG2肝癌細胞侵襲能力與生長活力變化的研究，探討兩者在HCC中表達的相關(guān)性及意義，為闡明HCC侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制及治療方向和預(yù)后判斷提供新的思路。
　　 材料和方法:
　　 應(yīng)用MTT

4、（四唑鹽比色試驗）、Transwell（細胞體外侵襲試驗）、RT-PCR、WesternBlot，免疫組化方法檢測在不同5-FU劑量(1:對照組，2：50ug/ml,3:100ug/ml,4:200ug/ml，5：400ug/ml)干擾下，HepG2肝癌細胞系中ANXA2、VEGF的表達以及兩者的相關(guān)性，同時觀測HepG2肝癌細胞侵襲能力與生長活力變化。
　　 結(jié)果:
　　 MTT方法檢測HepG2肝癌細胞生長抑制率隨著

5、5-FU劑量的增加逐漸增加，各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；Transwell檢測HepG2肝癌細胞侵襲力隨著5-Fu劑量的增加明顯降低，各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；RT-PCR檢測HepG2肝癌細胞中ANXA2、VEGF mRNA的表達量隨著5-FU劑量的增加逐漸下降，各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且兩者表達量具有顯著正相關(guān)性，spearman相關(guān)系數(shù)為rp=0.900;WesternB

6、lot檢測HepG2肝癌細胞中ANXA2、VEGF蛋白質(zhì)的表達量隨著5-FU劑量的增加逐漸下降，各劑量組間差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，且兩者表達量具有正相關(guān)性，spearman相關(guān)系數(shù)為rw=0.856;免疫組化檢測ANXA2、VEGF在細胞中的表達隨著5-Fu劑量的增加逐漸下降，各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 隨著5-FU劑量的逐漸增加，HepG2肝癌細胞侵襲力及細胞生長