Bmi1在肝癌組織及肝癌細(xì)胞系HepG2中的表達(dá)及其與細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的：檢測(cè)Bmi1在肝癌組織與肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)，探討B(tài)mi1與肝癌增殖與凋亡的關(guān)系，為肝癌的診斷、病情評(píng)估、治療及預(yù)后提供一個(gè)新的思路。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法對(duì)54例HCC標(biāo)本及相應(yīng)癌旁組織以及10例正常肝組織標(biāo)本的Bmi1基因及Ki67抗原的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，并采用TUNEL法檢測(cè)了上述標(biāo)本的凋亡。將構(gòu)建好的pCMV6-Bmi1載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HepG2，48h后采用Westernblot技術(shù)及實(shí)時(shí)

2、定量PCR對(duì)Bmi1的表達(dá)情況進(jìn)行鑒定。并使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的細(xì)胞周期與凋亡情況。
　　結(jié)果：免疫組化及凋亡檢測(cè)顯示HCC中Bmi1的高表達(dá)與年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、臨床TNM分期、是否有肝硬化及是否有HBsAg感染無(wú)顯著相關(guān)(P＞0.05)，但與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，高、中分化組Bmi1表達(dá)率顯著高于低分化組(P＜0.05)。肝癌Bmi1陽(yáng)性組增殖指數(shù)(PI)(50.3±21.4)％顯著高于陰性表達(dá)組(17.3±7.

3、1)％(P＜0.05)，凋亡指數(shù)(AI)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。Westernblot技術(shù)及實(shí)時(shí)定量PCR鑒定結(jié)果提示Bmi1蛋白和Bmi1mRNA在細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)，其生長(zhǎng)曲線可見(jiàn)pCMV6-Bmi1轉(zhuǎn)染組的HepG2細(xì)胞的增殖速度比未轉(zhuǎn)染組和pCMV6空載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞顯著升高。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示pCMV6-Bmi1轉(zhuǎn)染組與pCMV6空載體轉(zhuǎn)染組相比，G2％+S％明顯升高，DNA合成增多。加入5-FU作用24h，檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況