多烯紫杉醇對人肝癌細胞系HepG2蛋白質(zhì)組影響的體外實驗研究.pdf

1、肝癌(HCC)是全世界死亡率很高的疾病，手術(shù)切除是肝癌的首選治療方法，但許多病例為多中心發(fā)生，極易發(fā)生早期播散和轉(zhuǎn)移等復雜病情限制了手術(shù)切除的應用。肝癌對現(xiàn)有藥物全身化療的效果較差，因此尋找新的有效的化學治療藥物對提高晚期和復發(fā)肝癌病人的生存率具有重大意義。多烯紫杉醇是由漿果紫杉(European yew)針葉中提取的前體物，再經(jīng)半合成的產(chǎn)物。結(jié)構(gòu)與紫杉醇類似，抑制微管解聚的作用比紫杉醇更強。多烯紫杉醇用于乳腺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、

2、軟組織肉瘤、頭頸癌、胃癌、卵巢癌和前列腺癌等，單獨用藥和聯(lián)合用藥均有顯著療效。蛋白質(zhì)組學作為后基因組學時代研究的一個重要內(nèi)容，已廣泛深入到生命科學和醫(yī)藥學的各個領(lǐng)域，其理論和技術(shù)的發(fā)展完善為腫瘤研究帶來了新的思維方式和研究領(lǐng)域，它不僅可以從組織或細胞蛋白質(zhì)整體水平這一全新角度來研究腫瘤發(fā)病機理，而且能尋找用于腫瘤診斷和防治的生物標志物。蛋白質(zhì)組學技術(shù)使得從整體上觀察多烯紫杉醇對肝癌蛋白表達的影響成為可能。鑒定多烯紫杉醇作用相關(guān)蛋白質(zhì)，有

3、助于了解多烯紫杉醇治療肝癌的作用模式，可望從中篩選出評價多烯紫杉醇療效的特異蛋白質(zhì)和新藥開發(fā)的靶點。 研究目的: 觀察多烯紫杉醇的體外抗肝癌細胞HepG2的活性，通過比較多烯紫杉醇處理前后人肝癌細胞系HepG2蛋白質(zhì)表達譜的變化，鑒定多烯紫杉醇作用于肝癌細胞的相關(guān)蛋白質(zhì)，從蛋白質(zhì)水平上對多烯紫杉醇抗肝癌機制作初步探討。 研究方法: ①應用MTT比色觀察多烯紫杉醇對肝癌細胞HepG2的生長抑制作用，通過統(tǒng)計

4、分析確立多烯紫杉醇處理HepG2細胞的濃度。 ②進行分組觀察：以確立濃度的多烯紫杉醇處理組為實驗組；未加藥物干預的HepG2為對照組。 ③利用固相pH梯度(IPG)雙向凝膠電泳(2-DE)分離實驗組和對照組人肝癌細胞HepG2的總蛋白質(zhì)，凝膠銀染及考馬斯亮藍染顯色，建立雙向凝膠電泳圖譜。 ④經(jīng)Image Master軟件對實驗組和對照組的雙向凝膠電泳圖譜進行圖像分析，篩選差異表達蛋白質(zhì)。 ⑤應用基質(zhì)輔助激

5、光解吸電離飛行時間／飛行時間質(zhì)譜(MADI一TOF-TOF-MS)分析部分差異表達的蛋白質(zhì)點，獲取肽質(zhì)量指紋圖譜，MaSCOt軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。 結(jié)論: ①本研究通過MTT比色法觀察到多烯紫杉醇對人肝癌細胞HepG2有明顯的生長抑制作用，且呈濃度依賴性。表明多烯紫杉醇是一種對肝癌有治療潛力的藥物。 ②本研究通過提取對照組和實驗組細胞的總蛋白質(zhì)，進行雙向凝膠電泳，建立凝膠電泳圖譜，并應用Imag

6、e Master 2D Elite4.01軟件對獲取的凝膠圖像進行分析，發(fā)現(xiàn)差異表達蛋白質(zhì)。表明多烯紫杉醇能夠?qū)е氯烁伟┘毎鸋epG2蛋白質(zhì)表達譜的改變。 ③本研究應用MALDI-TOF-TOF-MS分析部分差異表達的蛋白質(zhì)點，獲取肽質(zhì)量指紋圖譜，通過MaSCOt軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫鑒定出了部分差異蛋白質(zhì)。包括甘油醛-3-磷酸脫氫酶，翻譯起始因子2，與肉豆蔻酸和三碘苯甲酸復合物結(jié)合的人血清白蛋白，烯醇酶-1，RNA識別基序