夏枯草提取物聯(lián)合化療藥對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的作用.pdf

1、背景和目的：
　　 惡性淋巴瘤（MalignantLymphoma，ML）是起源于人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞及其前體細(xì)胞的惡性增生性疾病。在我國(guó)ML發(fā)病率為惡性腫瘤的第11位，常發(fā)生在青壯年，嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命。目前聯(lián)合化療是治療ML的主要手段，在延長(zhǎng)患者生存期和提高療效方面起著重要的作用。但化療藥常引起的骨髓抑制、免疫功能低下等副反應(yīng)，常使患者難以堅(jiān)持治療，并且化療藥物在治療過(guò)程中出現(xiàn)的原發(fā)或繼發(fā)耐藥性已成為目前臨床治療中的難題

2、之一。因此，有必要尋求高效低毒的抗腫瘤藥物。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)傳統(tǒng)中藥的抗腫瘤作用進(jìn)行了廣泛而深入的研究，結(jié)果表明，許多中藥及其提取物能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。
　　 夏枯草為唇形科夏枯草屬植物夏枯草的干燥成熟果穗，具有清火明目，軟堅(jiān)散結(jié)之功效。其用于治療甲狀腺癌、淋巴肉瘤、腮腺癌、扁桃腺癌、鼻咽癌等由來(lái)已久?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明其具有廣泛的藥理活性，諸多體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究均發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤活性。但是，關(guān)于夏枯草

3、與抗腫瘤藥物聯(lián)合作用對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本課題通過(guò)體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)方法觀察了經(jīng)醇煎法制成的夏枯草提取物（Pruncllavulgarisextract，PVE）聯(lián)合化療藥對(duì)人淋巴瘤Raji細(xì)胞株增殖和細(xì)胞周期的影響，以及PVE對(duì)化療藥的增效作用，并初步探討PVE聯(lián)合化療藥對(duì)Raji細(xì)胞抑制作用的機(jī)理，以期為臨床聯(lián)合用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，MTT法檢

4、測(cè)PVE聯(lián)合紫杉醇（Paclitaxel，TAX）、多柔比星（Adriamycin，ADM）、順鉑（Cisplatin，DDP）、甲氨喋呤（Methotrexate，MTX）、長(zhǎng)春新堿（Vincristine，VCR）、阿糖胞苷（Cytrarabine，Ara-c）對(duì)Rajii細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率；流式細(xì)胞儀分析PVE與TAX聯(lián)合對(duì)Raji細(xì)胞周期分布的影響；免疫組化方法檢測(cè)PVE對(duì)Raji細(xì)胞內(nèi)survivin及caspase-3蛋白表達(dá)

5、的影響。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.夏枯草提取物對(duì)Raji細(xì)胞增殖的抑制作用不同濃度的夏枯草提取物作用于體外培養(yǎng)的Raji細(xì)胞48h后，可顯著抑制Raji細(xì)胞生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組相比，OD值的差異有顯著性（P<0.01），且隨著夏枯草提取物濃度的增加，其抑制率越來(lái)越高，

6、呈劑量依賴關(guān)系，其半數(shù)抑制濃度（IC50）值為30.2μg/ml。
　　 2.6種抗腫瘤藥物對(duì)Raji細(xì)胞增殖的抑制作用不同濃度的TAX，ADM，MTX，DDP，Arc-a，VCR單藥作用Raji細(xì)胞48h后，其生長(zhǎng)可受到不同程度的抑制，且抑制效應(yīng)在一定的濃度范圍內(nèi)隨著劑量的增加，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率逐漸增高。
　　 3.PVE聯(lián)合6種抗腫瘤藥對(duì)Raji細(xì)胞增殖的抑制作用PVE能明顯增強(qiáng)TAX、DDP對(duì)Raji細(xì)胞的抑制作用，

7、且差異具有顯著性；對(duì)ADM的增敏作用在低濃度時(shí)表現(xiàn)明顯，而對(duì)Ara-c的增效作用則表現(xiàn)在較高濃度；但PVE對(duì)MTX和VCR無(wú)明顯的增強(qiáng)抑制Raji細(xì)胞的增殖作用。
　　 4.PVE與TAX聯(lián)合對(duì)Raji細(xì)胞周期的影響TAX及與PVE聯(lián)合作用于Raji細(xì)胞48h，均可見(jiàn)典型的亞二倍體凋亡峰。PVE能加強(qiáng)TAX對(duì)Raji細(xì)胞的作用，與TAX單用比較，PVE與TAX合用組S期細(xì)胞數(shù)下降，G2～M期細(xì)胞數(shù)升高。
　　 5.PVE

8、對(duì)Raji細(xì)胞survivin和caspase-3蛋白表達(dá)的影響通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定凋亡基因相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果可知：PVE（30μg/mL）作用于Raji細(xì)胞48h，survivin蛋白表達(dá)減弱，而caspase-3蛋白表達(dá)增強(qiáng)，對(duì)照組與加藥組間差異顯著（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.PVE可明顯抑制Raji細(xì)胞的增殖，且抑制作用呈劑量依賴關(guān)系，IC50值為30.2μg/ml。
　　 2.PVE可增