全反式維甲酸聯合放射線照射對食管癌細胞周期、凋亡及NF-κB、β-catenin、CyclinD1表達的影響.pdf

1、目的：我國是食管癌高發(fā)國，其死亡率居惡性腫瘤的第四位，嚴重影響了人類的生命和健康。由于大多數食管癌發(fā)病隱匿，多數患者就診時己屬中晚期，失去了手術的時機，因此尋找更為合理有效的治療方法成為食管癌治療領域研究的熱點?；瘜W藥物治療在食管癌的綜合治療中占有越來越重要的地位。全反式維甲酸(ATRA)是迄今為止研究最為深入、作用最強的化療藥物之一，但單獨應用ATRA毒副作用大，易產生繼發(fā)性耐藥。應用放化療聯合，可以減少化療藥物的劑量，減輕其副作用，

2、達到協(xié)同增效的結果，因此探索ATRA與放射線聯合應用是腫瘤研究的一個重要方向。 本研究選擇食管癌細胞Eca109作為研究對象，通過檢測ATRA聯合放射線照射對食管癌細胞周期、凋亡的影響及NF-KB、β-catenin、CyclinD1蛋白表達的調節(jié)，試圖為食管癌的臨床治療提供理論依據。 方法：1 MTT比色法檢測不同濃度ATRA作用24小時、48小時、72小時后對食管癌細胞Eca109生長抑制率的影響。選取ATRA作用4

3、8小時后抑制率約為25％、50％的藥物濃度作為流式細胞術及細胞免疫化學的檢測濃度。 2應用流式細胞術檢測Eca109細胞周期及凋亡率。實驗分為：對照組：不做任何處理；ATRA處理組：終濃度分別為0.781amol/L、5μmol/L的ATRA；60Coγ放射線照射組： 6Gy單次照射；ATRA聯合60Coγ射線處理組：6Gy單次照射后分別加入0.78μmol/L、51μmol/L的ATRA。以上各組分別作用24小時、48

4、小時后上機檢測。 3采用免疫細胞化學法檢測51μmol/L ATRA處理48h前后Eca109細胞NF-κB/β-catenin、CyclinD1蛋白的表達情況。 4應用流式細胞術檢測各組Eca109細胞NF-κB、β-catenin、CyclinDl蛋白表達。實驗分組方法同2。 5實驗數據經統(tǒng)計軟件SPSS11.5處理，采用單因素方差分析、兩樣本的t檢驗、直線相關分析，以α=0.05為差異顯著性標準。 結果：1

5、 MTT比色法檢測結果顯示：隨ATRA濃度的增加，Eca109細胞生長抑制率上升。各濃度組和對照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。 2.Eca109細胞在濃度為0.78gmol/L的ATRA作用24小時后，G0/G1期細胞比例由35.40±1.57％增至40.47±1.96％，當ATRA濃度增加為5μmol/L時，G0/G1期細胞比例增至46.1 3±0.68％，兩組相比有顯著性差異（P＜0.05)；6Gy放射線照射后24小

6、時，G0/G1期細胞比例為38.73±1.33％；0.78μmol/L的ATRA與放射線聯合作用后24小時，G0/G1期細胞比例增至48.13±0.90％，5μmol/L的ATRA與放射線聯合作用，G0/G1期細胞比例增至51.30±1.04％，兩組相比有顯著性差異(P＜0.05)；ATRA聯合放射線作用組與各單獨作用組相比有顯著性差異(P＜0.05)；各作用組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。 ATRA、放射線及兩者聯

7、合分別作用48小時，Eca109細胞周期時相變化的分析結果與作用24d,時的分析結果一致。 3.Eca109細胞在濃度為0.78μmol/L的ATRA作用245時后，凋亡率由1.68±0.1 6％增至3.4 1±0.26％，當ATRA濃度增加為5gmol/L時，凋亡率為5.03±0.23％，兩組相比有顯著性差異(P＜0.05)；6Gy放射線照射后24小時，凋亡率增至2.69±0.1 6％；0.78μmol/L的ATRA與放射線聯

8、合作用后245時，凋亡率為8.00±0.48％，5μmol/L的ATRA與放射線聯合作用，凋亡率增至11.44±0.5 1％，兩組相比有顯著性差異(P＜0.05)；ATRA聯合放射線作用組與各單獨作用組相比有顯著性差異(P＜0.05)；各作用組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。 ATRA、放射線及兩者聯合分別作用48小時，Eca109細胞凋亡的變化的分析結果與作用24小時的分析結果一致。 4濃度為5μmol/L的

9、ATRA的作用48d小時后，Eca109細胞NF-KB、β-catenin、CyclinD1陽性細胞表達率均降低，顯著低于對照組(P＜0.05)。 5 ATRA作用Eca109細胞24d小時、485時后，NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表達降低，且隨著藥物濃度的增加其蛋白表達降低顯著(P＜0.05)；放射線單獨作用24小時、48小時其蛋白表達降低較少；ATRA聯合放射線作用組與各單獨作用組相比有顯著性差異(P

10、＜0.05)，且隨著藥物濃度的增加其蛋白表達降低顯著(P＜0.05)；各作用組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。NF-κB、CyclinD1蛋白表達呈正相關(P＜0.05)，β-catenin、CyclinD1蛋白表達呈正相關(P＜0.05)，NF-κB、β-catenin蛋白表達呈正相關(P＜0.05)。 結論：1 ATRA對Eca109細胞的生長抑制具有濃度依賴效應關系，隨著濃度的增加細胞生長抑制率上升。 2