間質(zhì)細(xì)胞對肺癌細(xì)胞明膠酶表達(dá)的影響及全反式維甲酸防治肺癌轉(zhuǎn)移的初步研究.pdf

1、腫瘤間質(zhì)微環(huán)境中成纖維細(xì)胞、炎性細(xì)胞與上皮細(xì)胞等相互作用影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。基質(zhì)金屬蛋白酶是一組鋅離子依賴性內(nèi)肽酶,腫瘤和間質(zhì)成分來源的基質(zhì)金屬蛋白酶均可通過降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的大部分成分影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶2,9能降解基底膜Ⅳ型膠原及參與血管新生,與腫瘤的關(guān)系密切。本文通過觀察腫瘤間質(zhì)細(xì)胞(成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞)對肺癌基質(zhì)金屬蛋白酶2,9表達(dá)的影響,旨在探討間質(zhì)微環(huán)境對肺癌轉(zhuǎn)移的影響,同時(shí)建立肺癌胸腔

2、種植轉(zhuǎn)移模型,觀察全反式維甲酸對肺癌轉(zhuǎn)移的干預(yù)作用,同時(shí)探討裸鼠血清中MMP-2,9的活性水平和ATRA干預(yù)對MMP-2,9表達(dá)的影響。因此本實(shí)驗(yàn)分為3部分:
　　 實(shí)驗(yàn)1、肺癌和胚肺成纖維細(xì)胞相互作用對基質(zhì)金屬蛋白酶2表達(dá)的影響。在單層平面培養(yǎng)條件下,H460細(xì)胞和胚肺成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基共同培養(yǎng),胚肺成纖維細(xì)胞和H460細(xì)胞條件培養(yǎng)基共同培養(yǎng),胚肺成纖維細(xì)胞分別按1:1,1:2,1:4,1:8與H460細(xì)胞共同培養(yǎng)。三維膠原

3、立體培養(yǎng)條件下,H460細(xì)胞和胚肺成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)。72 h后,明膠酶譜法測定培養(yǎng)基中MMP-2的表達(dá)。結(jié)果表明:胚肺成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基不能促進(jìn)H460細(xì)胞MMP-2酶原和活化酶的表達(dá),但H460細(xì)胞條件培養(yǎng)基能促進(jìn)胚肺成纖維細(xì)胞MMP-2酶原和活化酶的表達(dá)。胚肺成纖維細(xì)胞分別按1:1,1:2,1:8與肺癌H460細(xì)胞時(shí)共同培養(yǎng)時(shí),MMP-2酶原和活化酶的表達(dá)均增強(qiáng)；但1:4與肺癌H460細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)MMP-2酶原表達(dá)有所增加,但

4、活化酶未見改變。三維膠原立體H460細(xì)胞和胚肺成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)MMP-2酶原和活化酶的表達(dá)均增強(qiáng)且高于單層平面培養(yǎng)。
　　 實(shí)驗(yàn)2腫瘤和間質(zhì)細(xì)胞相互作用對肺癌基質(zhì)金屬蛋白酶2,9表達(dá)的影響。活性膠原立體培養(yǎng)分為:H460細(xì)胞和胚肺成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)組,H460細(xì)胞和單核細(xì)胞共同培養(yǎng)組,胚肺成纖維細(xì)胞和單核細(xì)胞共同培養(yǎng)組,H460細(xì)胞、胚肺成纖維細(xì)胞和單核細(xì)胞共同培養(yǎng)組4組。明膠酶譜法測定各組培養(yǎng)基中MMP-2,9活性。結(jié)果表

5、明:H460細(xì)胞和胚肺成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)MMP-2酶原和活化酶活性和表達(dá)增強(qiáng),H460和單核細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)MMP-2,9活性和表達(dá)均增強(qiáng),單核和胚肺成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí),出現(xiàn)了MMP-2酶原和活化酶的活性和表達(dá)增強(qiáng),H460細(xì)胞、胚肺成纖維細(xì)胞和單核細(xì)胞共同培養(yǎng)MMP-2活化酶和MMP-9活性和表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)。
　　 實(shí)驗(yàn)3全反式維甲酸對肺癌胸腔種植轉(zhuǎn)移動物模型的干預(yù)作用通過右側(cè)胸腔注射接種非小細(xì)胞肺癌H460細(xì)胞制作肺癌胸腔

6、種植裸鼠轉(zhuǎn)移模型,建模后給于ATRA干預(yù)。結(jié)果表明:接種H460細(xì)胞后所有動物均出現(xiàn)肺部腫瘤。病理證實(shí)腫瘤擴(kuò)散到臨近胸腔和遠(yuǎn)處腹腔器官,與人體病理情況一致。ATRA干預(yù)后,胸腔內(nèi)的腫瘤質(zhì)量(0.43±0.02)低于對照組(0.96±0.03),P<0.05,肝平均轉(zhuǎn)移灶數(shù)目和轉(zhuǎn)移發(fā)生率(0.08±0.28,8％)低于對照組(4.67±4.47,58％),P<0.05。胰腺平均轉(zhuǎn)移灶數(shù)目和轉(zhuǎn)移發(fā)生率(0.67±1.50,25％)低于對照組

7、(9±7.68,75％),P<0.05。后腹膜轉(zhuǎn)移灶數(shù)目(6.42±4.33)低于對照組(23±8.75),P<0.05,轉(zhuǎn)移發(fā)生率(83％)低于對照組(100％),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。造模后血清中MMP-2,9活性增高,ATRA干預(yù)后MMP-2活性明顯下降。
　　 綜合以上結(jié)果得出以下結(jié)論:
　　 1.肺癌H460細(xì)胞與胚肺成纖維細(xì)胞相互作用能通過上調(diào)MMP-2的表達(dá)和活化影響肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移。