全反式維甲酸對多種惡性腫瘤細胞血管生成的影響.pdf

1、背景及目的：
　　 2012年經(jīng)流行病學統(tǒng)計，我國惡性腫瘤發(fā)病前十位主要是肺癌、消化系統(tǒng)癌（胃癌、結直腸癌、肝癌、食管癌、胰腺癌）、乳腺癌、淋巴瘤、膀胱癌、甲狀腺癌。這十類腫瘤占全部惡性腫瘤發(fā)病的76.39％。根據(jù)第21屆世界抗癌大會公布的數(shù)據(jù)，中國癌癥發(fā)生率目前處于快速上升期。在河南，目前食管癌發(fā)病率仍較其它地區(qū)高，并且，男性罹患肺惡性腫瘤及女性罹患乳腺癌的發(fā)生率持高不下，抗癌治療在河南的衛(wèi)生系統(tǒng)總費用支出中占很大比例。

2、>　　 惡性腫瘤的內科治療在基礎研究成果的基礎上，正在不斷推進，較大幅度的提高了癌癥生存率。自1971年，由哈佛大學judahfolkman博士提出腫瘤生長的血管依賴性理論后，全球腫瘤內科專家、藥物專家等在腫瘤治療中創(chuàng)出一種全新的有別于腫瘤殺死概念的治療策略，即抗血管生成+抗細胞增殖的A+策略。
　　 腫瘤細胞引起的新生血管過程受局部組織中分泌的調節(jié)因子調控。起促進作用的調節(jié)因子如下:血管內皮細胞生長因子(VascularEn

3、dothelialGrowthFactor,VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(basicFibroblastGrowthFactors，bFGF)、血小板衍生生長因子（Platelet-DerivedGrowthfactor,PDGF）、血管生成素（Angiopoietin，Ang）、腫瘤壞死因子-α(TumorNecrosisFactor-α，TNF-α)、轉化生長因子-β（TransformingGrowthFactor-β，TG

4、F-β）、表皮生長因子(EpidemalGrowthFactor,EGF)、纖溶酶原激活因子(PlasminogenActivator,PA)等，另外還有一些小分子的脂類、核苷酸及維生素。而干擾素-α(Interferon-α，IFN-α)、內皮細胞抑制素(endostatin)、血管抑制素（angiostatin）、血小板因子4、堿性成纖維細胞生長因子可溶性受體等發(fā)揮抑制作用。
　　 在腫瘤細胞促進新生血管過程中，VEGF起到

5、非常重要及關鍵的作用?；A實驗創(chuàng)造體外的血管生成模型，其中顯示VEGF及其受體可導致內皮細胞增殖和新的血管生成，故其目前作為主要血管生成抑制劑的靶點。臨床治療腫瘤方面癡線以VEGF及其受體為靶點的一種治療方法，貝伐單抗(bevacizumab)，又名:重組人源性抗VEGF單克隆抗體貝伐單抗，是對這一策略由理論變?yōu)楝F(xiàn)實的有力證據(jù)，貝伐單抗可與血管內皮生長因子(VEGF)結合，阻斷其與受體在內皮細胞表面結合，進而阻斷器介導的血管生成過程。之

6、后由我國自主研發(fā)的重組人血管內皮抑制素（恩度）就是血管生成抑制類生物制品，其目標靶點亦為血管內皮生長生成因子。
　　 維甲酸為維生素A的衍生物，在調控細胞生長，分化、凋亡等過程中起重要作用，維甲酸類化合物初始為治療銀屑病的有效藥物，因其可明顯控制角質形成細胞的增殖及炎癥細胞浸潤，后由我國學者王振義首次使用全反式維甲酸(ATRA)治療急性非淋巴細胞白血病中的M3型，獲得了肯定的療效。許多研究證明，維甲酸類化合物作用廣泛，可誘導腫瘤

7、細胞分化，抑制細胞增殖，促進腫瘤細胞凋亡的作用，其中以全反式維甲酸抗腫瘤作用研究更確切。目前作為著名的腫瘤細胞誘導分化劑的代表。但有基礎研究表明全反式維甲酸具有一定血管抑制作用。
　　 本實驗使用ATRA體外作用于食管癌細胞EC109、肺腺癌細胞A549及乳腺癌細胞MDA-MB-231，觀察其對其作用及對VEGF因子的表達的作用。
　　 材料和方法：
　　 1.體外分別培養(yǎng)食管癌細胞EC109、肺腺癌細胞A549

8、及乳腺癌細胞MDA-MB-231，取呈對數(shù)期生長細胞，分別給予含10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mol/l濃度ATRA的培養(yǎng)液連續(xù)培養(yǎng)24、48、72、96h。
　　 2.應用MTT法檢測不同濃度不同時間的ATRA分別作用于三種腫瘤細胞株的細胞抑制率。
　　 3.使用ELISA測定72h后不同濃度ATRA對三種腫瘤細胞株血管內皮生長因子(VEGF)蛋白表達、分泌的影響。使用單因素方差檢測進行統(tǒng)計學分析。<

9、br>　　 結果：
　　 1.MTT法
　　 將含5種不同濃度的ATRA培養(yǎng)液培養(yǎng)3種腫瘤細胞，分別在24h、48h、72h、96h測定其A490，24h時藥物對各細胞抑制作用均不明顯，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，其他的時間點ATRA有不同程度的細胞增殖抑制作用，在96h時效應達最高，并呈劑量相關性，其中10-3mol/l濃度的抑制率最高。食管癌細胞EC109、肺腺癌細胞A549及乳腺癌細胞MDA-MB-231最高抑

10、制率最高分別為90.0％，51.2％，60.2％。與空白對照組相比，溶劑對照組A490無統(tǒng)計學差異，表明溶媒對細胞無增殖抑制性。
　　 2.ELISA法
　　 經(jīng)過藥物作用72h后，VEGF蛋白濃度隨藥物濃度的升高而下降，以10-3mol/l藥物濃度的VEGF蛋白表達量下降最為顯著，相對于空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而食管癌細胞EC109、肺腺癌細胞A549及乳腺癌細胞MDA-MB-231中以食管癌細

11、胞VEGF蛋白濃度降低最為顯著。
　　 結論：
　　 1.全反式維甲酸對食管癌細胞EC109、肺腺癌細胞A549及乳腺癌細胞MDA-MB-231增殖生長具有抑制作用，該作用具有劑量及時間依賴性。
　　 2.全反式維甲酸體外對三種腫瘤細胞株的抑制作用，主要通過下調其VEGF蛋白的表達，從而影響其血管生成。
　　 3.全反式維甲酸對食管癌細胞EC109的增殖抑制作用強于肺腺癌細胞A549及乳腺癌細胞MDA-M