細胞周期素Cyclin B1對紫杉醇誘導食管癌細胞凋亡調(diào)控作用的研究.pdf

1、食管癌是人類最常見的惡性腫瘤之一。目前食管癌在全世界的發(fā)病率占所有惡性腫瘤的第八位，因食管癌導致的死亡人數(shù)占所有腫瘤死亡患者的5.7％。我國是食管癌的高發(fā)區(qū)，世界上70％的食管癌發(fā)生在我國，由于診斷較晚治療效果較差，食管癌的五年生存率僅10％左右，在我國的惡性腫瘤死亡率中居第四位。在食管癌化療中，抑制微管蛋白聚合和微管解聚從而引起細胞凋亡的藥物是非常重要的一類，紫杉醇是這類藥物中常用的藥物。研究表明，細胞周期素CyclinB1和微管損傷

2、誘導的細胞凋亡有重要聯(lián)系。 CyclinB1是調(diào)控細胞由G2期向M期轉(zhuǎn)換的重要因子之一。G2期末CyclinB1的表達達到高峰，激活CDC2，形成CyclinB1/CDC2復合物，進入細胞核，裂解一系列底物蛋白，推動細胞從DNA合成期進入有絲分裂期。 本實驗室采用免疫組織化學的方法分別比較205例配對食管癌癌組織和癌旁組織的CyclinB1蛋白表達水平的差異，發(fā)現(xiàn)在食管癌細胞中存在CyclinB1高表達的現(xiàn)象。挑選了Cy

3、clinB1低表達的KYSE150細胞株采用轉(zhuǎn)染的方法，外源導入pCDNA3.1CyclinB1質(zhì)粒，構(gòu)建CyclinB1高表達的穩(wěn)定細胞株。實驗結(jié)果表明CyclinB1高表達能增強細胞的增殖能力、致瘤性以及穿透能力，抑制順鉑誘導的食管癌細胞凋亡。 為了深入研究CyclinB1蛋白表達水平對食管癌細胞的影響，我們用Westernblot的方法挑選了CyclinB1高表達的EC9706細胞株采用轉(zhuǎn)染的方法，外源導入pGCsi-U6

4、/Neo/GFP/shCyclinB1，挑選單克隆，用Westernblot方法檢測CyclinB1蛋白表達的差異，用RT-PCR方法檢測CyclinB1mRNA水平，擴增后構(gòu)建穩(wěn)定低表達CyclinB1的細胞株，同時建立轉(zhuǎn)染pGCsi-U6/Neo/GFP-Non的細胞株作為空載對照。繪制各細胞株的生長曲線比較其增殖能力?？寺⌒纬珊蚑ranswell實驗分別比較各細胞株的致瘤性和體外侵襲能力。給予一定濃度紫杉醇處理各細胞株，比較其生存

5、率；采用細胞免疫熒光的方法觀察細胞核形態(tài)的變化；測定各細胞株P(guān)ARP蛋白剪切水平，綜合實驗結(jié)果比較各細胞株在紫杉醇處理后的凋亡水平。 實驗結(jié)果顯示，兩個CyclinB1低表達細胞株與EC9706、空載細胞株相比：細胞生長速度減慢、增殖能力下降；致瘤性和體外侵襲能力降低。紫杉醇處理后生存率降低，細胞核形態(tài)發(fā)生凋亡變化的細胞比例升高。由此可以得出結(jié)論，CyclinB1的低表達會抑制食管癌細胞的增殖，降低食管癌細胞的致瘤性及侵襲能力，

6、增強化療藥物誘導的食管癌細胞凋亡，使其對化療藥敏感性增高。 檢測紫杉醇作用后各細胞株CyclinB1蛋白的表達情況，發(fā)現(xiàn)EC9706、空載細胞株與兩個低表達細胞株的CyclinB1蛋白表達量均與藥物處理前相比有顯著提高，說明藥物可以誘導或促進食管癌細胞CyclinB1蛋白的表達。文獻報道，細胞表達的CyclinB1蛋白和受藥物誘導而表達的CyclinB1蛋白在細胞定位以及出核入核機制上存在不同。非藥物誘導的CyclinB1蛋白主

7、要位于細胞質(zhì)，而藥物誘導表達的CyclinB1蛋白主要集中在細胞核。CyclinB1蛋白低表達增強細胞凋亡的可能機制是，正常表達的CyclinB1蛋白存在于細胞質(zhì)中，促進細胞增殖、抑制細胞凋亡；藥物誘導的CyclinB1蛋白存在于細胞核中，促進細胞凋亡。其中的確切過程和機制還有待進一步研究。 CyclinB1蛋白的表達水平和食管癌細胞的增殖速度密切相關(guān)，CyclinB1的過表達可導致腫瘤細胞的惡性度增加、增強腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力。