脂肪肝合并高脂血癥患者外周血PPARα基因甲基化水平研究.pdf

1、目的:脂肪肝是指由于各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過(guò)多的病變。脂肪肝正嚴(yán)重威脅國(guó)人的健康，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公認(rèn)為隱蔽性肝硬化的常見(jiàn)原因，但是脂肪肝發(fā)病的分子機(jī)制尚未完全明確。高脂血癥是血脂代謝異常的疾病，目前研究表明脂肪肝與脂代謝關(guān)系密切。近年研究發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisomeproliferators-activatedreceptors，PPARs）的一個(gè)亞型PPARα具有調(diào)節(jié)脂代謝、炎癥

2、、免疫以及細(xì)胞分化等作用，從而參與脂肪肝、高脂血癥的發(fā)病。DNA甲基化是指由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化，將活性甲基轉(zhuǎn)移至胞嘧啶的C5位上，形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)的過(guò)程。近來(lái)大量研究表明DNA甲基化在代謝性疾病中有重要作用。PPARα甲基化在脂肪肝和高脂血癥發(fā)病機(jī)制中是否發(fā)揮作用，目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以人全血為標(biāo)本，檢測(cè)PPARα甲基化水平，結(jié)合患者臨床資料分析該基因在高脂血癥、脂肪肝合并高脂血癥發(fā)生中的作用，為PPARα啟動(dòng)子區(qū)域甲

3、基化檢測(cè)在臨床中的應(yīng)用提供理論支持，將有助于闡明脂肪肝合并高脂血癥的發(fā)病機(jī)制，為尋找治療新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、收集臨床資料收集20-60歲門診和體檢人員入組，分為健康對(duì)照組(N)、高脂血癥組(NT)和脂肪肝合并高脂血癥組(TT)三組。記錄人群的性別、年齡，測(cè)量人群的身高和體重，計(jì)算體重指數(shù)。
　　2、檢測(cè)生化指標(biāo)測(cè)定血清中總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度

4、脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量。
　　3、檢測(cè)PPARα甲基化水平利用血基因組DNA試劑盒分別對(duì)N組，NT組，TT組提取DNA，利用EZ DNA甲基化試劑盒對(duì)PPARα啟動(dòng)子區(qū)域甲基化進(jìn)行甲基化特異性PCR（Methylation Specific PCR，MSP）檢測(cè)。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，以P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

5、結(jié)果:
　　1、三組人群一般情況比較
　　N組60例，性別（男/女）為24/36，年齡為42.66±7.18;NT組62例，性別（男/女）為25/37，年齡為41.2±8.80;TT組65例，性別（男/女）26/39，年齡為44.27±12.02。三組年齡相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。NT組身高和體重分別為162.00±6.61，64.67±7.39，較N組165.27±8.02，63.97±9.55無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0

6、.05)，而NT組體重指數(shù)為24.69±2.93，明顯高于N組23.31±2.14(P＜0.05); TT組身高、體重、體重指數(shù)分別為167.30±9.24，75.9±12.26，27.03±2.97，均顯著高于NT組（P＜0.05）。
　　2、三組人群生化指標(biāo)變化
　　NT組TCH和TG分別為5.03±1.72，2.32±1.02顯著高于N組2.12±1.66和1.33±0.42(P＜0.05)，NT組HDL-C為1.42

7、±0.39，顯著低于N組1.65±0.45(P＜0.05)，而NT組LDL-C為3.15±1.05，與N組1.89±0.31無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。TT組TG為2.83±1.86，顯著高于NT組(P＜0.05)，TT組HDL-C為1.28±0.31，顯著低于NT組（P＜0.05），而TT組TCH和LDL-C分別為5.01±1.33，3.17±0.91與NT組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3、PPARα甲基化狀態(tài)比較

8、r>　　PPARα甲基化狀態(tài)有三種情況:一是完全甲基化狀態(tài);二是半甲基化狀態(tài);三是完全非甲基化狀態(tài)。半甲基化狀態(tài)按甲基化計(jì)算。
　　3.1 N組、NT組、TT組PPARα基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平比較
　　N組和NT組及TT組甲基化陽(yáng)性率分別為:8.33％、9.68％、23.08％。NT組甲基化陽(yáng)性率與N組無(wú)明顯差異(P＞0.05);TT組甲基化陽(yáng)性率明顯高于N組及NT組(P＜0.05)。
　　3.2 PPARα基因啟動(dòng)

9、子區(qū)甲基化狀態(tài)與患者臨床資料間的相關(guān)性分析
　　PPARα基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)在年齡(P=0.30)、身高(P=0.26)、體重(P=0.12)、體重指數(shù)(P=0.94)、TCH(P=0.06)、HDL-C(P=0.33)和LDL-C(P=0.47)中無(wú)相關(guān)性。但是PPARα基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與TG有相關(guān)性(P=0.02)。
　　結(jié)論:
　　1、脂代謝紊亂所致高脂血癥與脂肪肝發(fā)病有密切聯(lián)系。
　　2、脂肪肝合并