中國(guó)漢族人群急性肺損傷-急性呼吸窘迫綜合征的遺傳易感性研究.pdf

1、第一部分 TIRAP基因多態(tài)性與膿毒癥致ALI/ARDS易感性關(guān)聯(lián)研究
　　目的：TIRAP基因編碼的銜接蛋白-Mal是Toll樣受體(TLRs)信號(hào)傳導(dǎo)通路的重要銜接蛋白，在信號(hào)傳導(dǎo)通路中具有重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)TLRs信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的炎癥介質(zhì)過(guò)量生成參與了ALI/ARDS的發(fā)病。最近研究發(fā)現(xiàn)TIRAP基因變異與多種炎癥相關(guān)性疾病的易感性相關(guān)。本研究探討TIRAP基因變異是否與中國(guó)漢族人群膿毒癥致ALI/ARDS的發(fā)病相關(guān)。

2、
　　方法：臨床上收集278例膿毒癥致ALI/ARDS患者、288例單獨(dú)膿毒癥患者和298例健康對(duì)照個(gè)體，利用中國(guó)漢族人群Hapmap數(shù)據(jù)庫(kù)選擇TIRAP基因的3個(gè)tag SNPs(rs595209，rs3802813和rs8177375)和2個(gè)文獻(xiàn)報(bào)道的與炎癥相關(guān)性疾病易感性相關(guān)的SNPs(rs8177374和rs7932766)進(jìn)行研究；運(yùn)用PCR直接測(cè)序的方法進(jìn)行SNPs分型，基因型頻率和等位基因頻率在各組之間的比較采用x2

3、檢驗(yàn)，運(yùn)用Bonferroni方法進(jìn)行校正和Logistic回歸分析去除混雜因素的影響。
　　結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)TIRAP基因的5個(gè)SNPs等位基因頻率分布在研究樣本中均符合Hardy-Weinberg平衡，5個(gè)SNPs之間的連鎖不平衡程度較弱。位于基因3’端區(qū)域的rs8177375和內(nèi)含子區(qū)域的rs595209與中國(guó)漢族人群ALI/ARDS的易感性有關(guān)。ALI/ARDS患者rs8177375等位基因G的頻率明顯高于單獨(dú)膿毒癥組(p=

4、0.00079)和正常對(duì)照組(p=0.0001)，基因型頻率相比也具有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，攜帶等位基因G的個(gè)體更易患ALI/ARDS；ALI/ARDS患者rs595209A的等位基因頻率也顯著高于單獨(dú)膿毒癥組(p=0.004.1)和正常對(duì)照組(p=0.0027)，攜帶等位基因A的個(gè)體更易患ALI/ARDS，基因型頻率也存在顯著性差異。rs8177375(C/A)和rs595209(A/G)組成的單倍型也與ALI/ARDS的易感性有關(guān)，與

5、單個(gè)SNP相比差異更顯著。ALI/ARDS患者組單倍型AG(rs595209A/rs8177375G)頻率高于單獨(dú)膿毒癥組(OR=2.24，95％CI1.52-3.29，p=0.00003)和正常對(duì)照個(gè)體(OR=2.13，95％CI1.46.3.09，P=0.00006)。攜帶單倍型CA的個(gè)體不易患ALI/ARDS。運(yùn)用Bonferroni方法進(jìn)行校正和Logistic回歸分析去除混雜因素后以上差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：T

6、IRAP基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群膿毒癥致ALI/ARDS的易感性顯著相關(guān)。
　　第二部分 TLRs信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)基因多態(tài)性與ALI/ARDS易感性關(guān)聯(lián)研究
　　目的：TLRs信號(hào)通路的過(guò)度激活和負(fù)性調(diào)節(jié)因子的功能失調(diào)均可引起炎癥介質(zhì)的過(guò)量生成，導(dǎo)致組織和器官的損傷，在ALI/ARDS的發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。本部分研究選擇TLRs信號(hào)傳導(dǎo)通路及負(fù)性調(diào)節(jié)因子的部分基因IRAK1、TRAF6、SIGIRR和IRAK3進(jìn)行研究

7、，探討以上基因SNPs與中國(guó)漢族人群ALI/ARDS遺傳易感的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：臨床上收集336例ALI/ARDS患者和384名對(duì)照患者(入住ICU，具有ALI/ARDS發(fā)病的高危因素，而未進(jìn)展至ALI/ARDS)入選本部分研究。根據(jù)Hapmap數(shù)據(jù)庫(kù)共選擇IRAK1、TRAF6、SIGIRR和IRAK3基因的17個(gè)tag SNPs，利用SNPstream技術(shù)平臺(tái)對(duì)17個(gè)SNPs進(jìn)行分型?；蛐皖l率和等位基因頻率在各組之間的比較

8、采用x2檢驗(yàn)，運(yùn)用Bonferroni方法進(jìn)行校正檢驗(yàn)和Logistic回歸分析去除混雜因素的影響。
　　結(jié)果：4個(gè)基因的17個(gè)SNPs成功分型，且所有的SNPs等位基因分布在研究樣本中均符合HWE。研究發(fā)現(xiàn)：①TRAF6基因rs4755453的等位基因頻率和基因型頻率在ALI/ARDS組和對(duì)照組之間存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.0000187，P=0.00015)。ALI/ARDS患者rs4755453C的頻率(10.7％)明顯

9、低于對(duì)照組(18.8％)，等位基因C對(duì)ALI/ARDS的患病具有保護(hù)作用(OR=0.52，95％CI0.38-0.70)；Logistic回歸分析去除混雜因素后等位基因頻率(p=0.000062，OR=0.61，95％CI0.46-0.78)和基因型頻率分布(p=0.00046)仍有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Bonferroni校正后等位基因和基因型頻率在兩組之間仍存在顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；②IRAK3基因rsl370128和rs2289314

10、等位基因頻率和基因型頻率在對(duì)照組和ALI/ARDS疾病組之間也存在顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但運(yùn)用Logistic去除混雜因素和Bonferroni校正后等位基因和基因型頻率在兩組之間無(wú)顯著性差異(p>0.05)。Haplotype分析發(fā)現(xiàn)IRAK3基因10個(gè)SNPs組成2個(gè)單倍域共包括7種單倍型，2個(gè)單倍域與ALI/ARDS發(fā)病無(wú)明顯的相關(guān)性；7種單倍型的分布頻率在兩組之間無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；⑨IRAK1基因的1個(gè)tag SNP和SIGIR

11、R基因的3個(gè)tag SNPs的等位基因和基因型頻率分布在兩組之間無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：TRAF6基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群ALI/ARDS的遺傳易感性相關(guān)。
　　第三部分
　　TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)基因多態(tài)性與ALI/ARDS易感性關(guān)聯(lián)研究
　　目的：TNF-α是一種多效應(yīng)的細(xì)胞因子，具有極強(qiáng)的促炎性反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)功能，是炎癥反應(yīng)的核心環(huán)節(jié)，已有大量的研究證實(shí)TNF-α在ALI/ARDS發(fā)病機(jī)制中具

12、有重要的作用。TNF-α主要通過(guò)細(xì)胞膜上的受體(TNF receptor，TNFR)發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。A20是TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子，是防止體內(nèi)炎癥反應(yīng)失控的重要調(diào)節(jié)蛋白。本研究選擇TNF-α、TNFRSF1A、TNFRSF1B和TNFAIP3作為候選基因，探討以上基因的SNPs與中國(guó)漢族人群ALI/ARDS遺傳易感的相關(guān)性。
　　方法：臨床上收集336例ALI/ARDS患者和384名對(duì)照患者(入住ICU，具有ALI

13、/ARDS發(fā)病的高危因素，而未進(jìn)展至ALI/ARDS)入選本部分研究。共選擇TNF-α、TNFRSF1A、TNFRSF1B和TNFAIP3基因的14個(gè)SNPs進(jìn)行研究，利用PCR-直接測(cè)序法和SNPstream技術(shù)平臺(tái)對(duì)14個(gè)SNPs進(jìn)行分型?；蛐皖l率和等位基因頻率在各組之間的比較采用x2檢驗(yàn)，運(yùn)用Bonferroni方法進(jìn)行校正和Logistic回歸分析去除混雜因素影響。
　　結(jié)果：14個(gè)SNPs的等位基因分布在研究樣本中均符

14、合HWE。研究發(fā)現(xiàn)：①TNFAIP3基因rs661561等位基因頻率在ALI/ARDS組和對(duì)照組之間存在著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.0002)，等位基因T頻率在ALI/ARDS組為7.5％，明顯低于對(duì)照組的頻率13.6％，等位基因T對(duì)ALI/ARDS的發(fā)病具有保護(hù)作用(OR=0.52，95％C10.36-0.74)。rs661561基因型GG、GT和TT的頻率在兩組之間也存在著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.001)。Logistic回歸分析

15、去除混雜因素后rs661561等位基因頻率(p=0.00052，OR=0.56，95％CI0.46-0.81)和基因型頻率分布(p=0.0016)在兩組之間的差異仍有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Bonferroni校正后等位基因和基因型頻率在兩組之間仍存在顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Haplotype分析發(fā)現(xiàn)由2個(gè)SNPs(rs661561和rs610604)組成的單倍域與ALI/ARDS的發(fā)病明顯相關(guān)，單倍型GT的頻率在兩組之間存在著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

16、(p=0.00039，OR=1.87，95％CI1.32-2.65)，ALI/ARDS患者單倍型GT的頻率(92.2％)明顯高于對(duì)照組(86.3％)，攜帶GT的個(gè)體易患ALI/ARDS；單倍型TG的頻率在兩組之間也存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.029，OR=0.63，95％CI0.42-0.96)，攜帶單倍型TG個(gè)體不易患ALI/ARDS，Logistic回歸分析后仍具有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；②TNF-α基因的4個(gè)SNPs、TNFRSF1