反義MCP-1-反義MIP-1β基因在大鼠脊髓繼發(fā)性損傷中的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、該研究采用經(jīng)典的Nystrom大鼠脊髓背側(cè)壓迫損傷模型,在脊髓損傷后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)取材、收集標(biāo)本,運(yùn)用RT-PCR、Western-blot以及免疫組化技術(shù)分析脊髓損傷后局部MCP-1、MIP-1β的表達(dá)與分布、單核/巨噬細(xì)胞的浸潤等變化規(guī)律.進(jìn)而采和干擾RNA技術(shù),構(gòu)建反義MCP-1基因siRNA-pSilencer-MCP-1質(zhì)粒、反義MIP-1β基因siRNA-pSilencer-MIP-1β質(zhì)粒,并酶切鑒定.培養(yǎng)新生大鼠的星形膠質(zhì)細(xì)

2、胞,觀察在前炎細(xì)胞因子TNF-α刺激下星形膠質(zhì)細(xì)胞在兩個(gè)反義基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后MCP-1、MIP-1β分子與蛋白水平的變化,以探討反義基因的作用效果.最后,將反義基因質(zhì)粒通過蛛網(wǎng)膜下腔置管注入到脊髓損傷部位,運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法半定量分析反義基因治療前后SCI早期MCP-1、MIP-1β陽性細(xì)胞以及單核/巨噬細(xì)胞的變化規(guī)律,觀察反義基因治療對殘存神經(jīng)元數(shù)目的影響.總之,該研究運(yùn)用當(dāng)前先進(jìn)的干擾RNA技術(shù)構(gòu)建了反義MCP-1、MIP-1β