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1、背景與目的:
趨化因子(Chemokines)是一組多達(dá)50多種的低分子量多肽,它們的分子結(jié)構(gòu)前端均有四個(gè)半胱氨酸,目前根據(jù)前兩個(gè)半胱氨酸間是否存在其他氨基酸而被分為四個(gè)家族,即CC、CXC、C及CX3C(X代表其他任何氨基酸)。趨化因子能趨化淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等各種白細(xì)胞向炎癥部位聚集,介導(dǎo)了免疫細(xì)胞對(duì)組織的浸潤(rùn)、定位及活化,并具有趨化淋巴細(xì)胞并形成淋巴濾泡的功能,它們的表達(dá)是導(dǎo)致自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展的一個(gè)
2、重要因素。
巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)和單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)是體內(nèi)一些重要的趨化因子,已證實(shí)其參與了多種自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。Graves病(GD)和橋本甲狀腺炎(HT)是臨床上常見(jiàn)的自身免疫性甲狀腺疾病,以甲狀腺內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和甲狀腺自身抗體形成為特征。MIP-1α、MIP-1β和MCP-1是否參與了自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生發(fā)展,目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)
3、人研究,國(guó)外也研究較少。本研究應(yīng)用SP(Streptavidin/Peroxidase)免疫組化方法觀察MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在GD、HT、甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺組織中的表達(dá)情況,應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)患者血清趨化因子水平,并與患者術(shù)前血清中甲狀腺自身抗體進(jìn)行相關(guān)性分析,以探討這些趨化因子在自身免疫性甲狀腺疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。
方法:
收集自2009-2011年在我院住院的甲
4、狀腺手術(shù)患者的甲狀腺組織標(biāo)本及術(shù)前血清,其中GD組44例(男33例,女11例),年齡(33.4±1.51)歲;TH組19例(男0例,女19例),年齡(47.4±2.24)歲;結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組10例(男4例,女6例),年齡(55.1±3.32)歲;甲狀腺腺瘤組14例(男4例,女10例),年齡(42.3±4.07)歲,正常對(duì)照組8例(男2例,女6例),年齡(43.3±3.08)歲,標(biāo)本為取自甲狀腺腺瘤周?chē)=M織。另取8例(男3例,女5例)
5、,年齡(40.3±1.08)歲,在體檢科體檢健康者,抽取血液標(biāo)本檢測(cè)趨化因子作為正常對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn):所有病例均經(jīng)臨床、實(shí)驗(yàn)室檢查及病理診斷確診;排除標(biāo)準(zhǔn):排除近期有感染史、女性妊娠、腫瘤、肺部疾病、心血管疾病、器官移植及其他免疫炎性疾病。所有組織標(biāo)本經(jīng)固定、脫水、包埋后切片行HE和免疫組織化學(xué)染色,每張切片隨機(jī)選擇互不重疊的10個(gè)高倍鏡視野,結(jié)果判定:細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。細(xì)胞陽(yáng)性率評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞陽(yáng)性率<5%為0分;5%~25%
6、為1分;>25%~50%為2分;>50%~75%為3分;>75%為4分)。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):無(wú)染色為0分;淡黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐為3分。將細(xì)胞陽(yáng)性率評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的的乘積作為該標(biāo)本被檢趨化因子表達(dá)強(qiáng)度的評(píng)分。表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):0分為陰性(-);1~2分為弱陽(yáng)性(+);3~6分為陽(yáng)性(++);>6為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。所有血清標(biāo)本采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中三種趨化因子濃度并收集患者術(shù)前血清TGAb、TPOAb、TRAb的檢測(cè)結(jié)
7、果。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析,陽(yáng)性表達(dá)采用等級(jí)資料的非參數(shù)檢驗(yàn),定量資料的比較采取非參數(shù)檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,P<0.05(雙側(cè))為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
應(yīng)用SP免疫組化法檢測(cè)44例GD、19例HT、14例甲狀腺腺瘤、10例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和8例正常甲狀腺組織中MIP-1α、MIP-1β和MCP-1的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:在GD和HT組織中,MIP-1α、MI
8、P-1β和MCP-1陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)主要位于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),呈淡黃色、棕黃色或黃褐色。在TH組織中,可見(jiàn)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞胞核及部分淋巴濾泡生發(fā)中心淋巴細(xì)胞亦有陽(yáng)性表達(dá),被大量淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)的間質(zhì)中殘存的甲狀腺濾泡細(xì)胞團(tuán)幾乎全部表達(dá),HE染色為嗜酸性變的細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度更高,染色呈棕褐色團(tuán)塊狀。MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在甲狀腺腺瘤和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的表達(dá)呈中低度表達(dá),染色呈黃色或淺黃色,MIP-1α、MIP-1β
9、和MCP-1在正常甲狀腺組織中幾乎不表達(dá),極少的上皮細(xì)胞呈淺黃色,MIP-1α、MIP-1β和MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在GD、HT組織中表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及甲狀腺腺瘤(P<0.05)。而在GD與HT組之間相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。其在正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及甲狀腺腺瘤間的表達(dá)亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
Spearman相關(guān)分析顯示,GD患者甲狀腺內(nèi)MIP-1α的表
10、達(dá)程度與血清TRAb值呈正相關(guān)(r=0.504,P<0.05),與血清TGAb值呈正相關(guān)(r=0.365,P<0.05),與TPOAb亦密切正相關(guān)(r=0.561,P<0.05);其MIP-1β的表達(dá)程度與血清TRAb值呈正相關(guān)(r=0.419,P<0.05),與血清TGAb值呈正相關(guān)(r=0.434,P<0.05),與TPOAb亦密切正相關(guān)(r=0.491,P<0.05);MCP-1的表達(dá)程度與血清TRAb值呈正相關(guān)(r=0.482,
11、P<0.05),與血清TGAb值呈正相關(guān)(r=0.398,P<0.05),與TPOAb呈密切正相關(guān)(r=0.456,P<0.05);HT患者甲狀腺內(nèi)MIP-1α的表達(dá)程度與血清TGAb值呈正相關(guān)(r=0.501,P<0.05),與TPOAb呈密切正相關(guān)(r=0.397,P<0.05);其MIP-1β的表達(dá)分布與血清TGAb值呈正相關(guān)(r=0.536,P<0.05),與TPOAb呈密切正相關(guān)(r=0.426,P<0.05);MCP-1的表
12、達(dá)分布與血清TGAb值呈正相關(guān)(r=0.501,P<0.05),與TPOAb呈密切正相關(guān)(r=0.397,P<0.05)。
應(yīng)用ELISA檢測(cè)各組病例血清MIP-1α、MIP-1β、MCP-1水平(見(jiàn)表6),血清MIP-1α水平在各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.326,P>0.05)。血清MIP-1β水平在各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.600,P>0.05)。血清MCP-1水平在各組間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=5.6
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