Ets-1基因在胃癌組織中的表達(dá)及其反義寡核苷酸治療胃癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:(1)研究Ets-1基因表達(dá)與胃癌的生物學(xué)行為、預(yù)后的關(guān)系.(2)研究Ets-1基因的反義寡核苷酸對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901的Ets-1mRNA、Ets-1蛋白表達(dá)的影響,探討Ets-1基因的反義寡核苷酸對(duì)SGC-7901細(xì)胞體外異質(zhì)性粘附、侵襲、趨化以及體外管道形成能力的影響.(3)在細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,通過(guò)建立裸鼠人胃癌移植瘤模型,觀察Ets-1基因的反義寡核苷酸對(duì)裸鼠胃癌瘤體生長(zhǎng)的抑制作用,探討其體內(nèi)抗腫瘤作用.方法:(1)

2、應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)86例胃癌手術(shù)標(biāo)本中Ets-1基因的表達(dá)情況,分析其表達(dá)與胃癌臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系.(2)設(shè)計(jì)合成與Ets-1mRNA堿基序列互補(bǔ)的Ets-1基因的反義寡核苷酸,導(dǎo)入SGC-7901細(xì)胞,RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Ets-1基因的反義寡核苷酸對(duì)SGC-7901細(xì)胞Ets-1mRNA、Ets-1蛋白表達(dá)的影響;MTT比色法、體外侵襲和趨化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Ets-1反義寡核苷酸對(duì)SGC-7901細(xì)胞體外異質(zhì)性粘附

3、、侵襲、趨化能力的影響;體外管道形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Ets-1反義寡核苷酸對(duì)SGC-7901細(xì)胞體外管道形成能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MMP-7表達(dá)的變化.(3)通過(guò)接種SGC-7901細(xì)胞于裸鼠皮下,制作裸鼠人胃癌皮下移植瘤模型.分別用Ets-1的反義寡核苷酸、正義寡核苷酸及生理鹽水對(duì)皮下移植瘤內(nèi)直接進(jìn)行多點(diǎn)注射治療,連續(xù)12d,觀測(cè)裸鼠胃癌移植癌的體積變化及瘤重變化,計(jì)算抑瘤率;免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)移植瘤Ets-1蛋白、MMP-7以及微血管

4、密度的變化.結(jié)論:(1)胃癌組織中Ets-1蛋白表達(dá)增加,促進(jìn)了胃癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移.Ets-1蛋白的表達(dá)程度可以作為手術(shù)判斷預(yù)后的一種指標(biāo).(2)Ets-1基因的反義寡核苷酸對(duì)SGC-7901細(xì)胞Ets-1mRNA的表達(dá)具有抑制作用,該作用呈現(xiàn)濃度依賴性、時(shí)間依賴性,并呈現(xiàn)序列特異性;Ets-1基因的反義寡核苷酸對(duì)SGC-7901細(xì)胞侵襲基底膜的三個(gè)步驟,即與細(xì)胞外基質(zhì)的異質(zhì)性粘附能力、穿透基底膜的能力以及在趨化因子作用下的運(yùn)動(dòng)能力有顯著