c-Abl激酶在整合素αvβ3介導(dǎo)的黑色素瘤細胞黏著和遷移中作用及機制研究.pdf

1、腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移是癌癥高致死率的主要原因，而細胞浸潤和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)是細胞遷移。整合素作為細胞膜上的黏附分子，一方面通過胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域與胞內(nèi)的細胞骨架結(jié)合在一起，另一方面通過胞外的球狀結(jié)構(gòu)域與細胞外基質(zhì)連接在一起，從而使細胞錨定在細胞外基質(zhì)上。另外整合素還能夠整合細胞內(nèi)外的信號從而調(diào)節(jié)細胞的遷移，所以整合素對于細胞的遷移是非常關(guān)鍵的。αvβ3整合素在許多腫瘤細胞都有高表達，包括乳腺癌細胞、前列腺癌細胞、黑色素瘤細胞和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞。αvβ3

2、整合素在腫瘤細胞的高表達與腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，尤其是腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。
　　整合素介導(dǎo)腫瘤細胞的黏附和遷移主要是通過與細胞骨架聯(lián)系形成黏著斑，并通過黏著斑的組裝與去組裝的動態(tài)時空變化來實現(xiàn)的。整合素本身沒有酶活性，其作用一般由一些相關(guān)的激酶來調(diào)節(jié)。c-Abl激酶作為細胞內(nèi)的非受體酪氨酸激酶能夠使許多蛋白分子磷酸化，激活相應(yīng)的靶分子、調(diào)控細胞骨架的重組或基因的表達，從而參與細胞的凋亡、分化、衰老等多種生理過程，有研究報道

3、認為它參與了細胞的遷移過程。
　　在本論文中，通過transwell、單層細胞劃痕等遷移實驗?zāi)Ｐ桶l(fā)現(xiàn)c-Abl激酶參與了PDGF誘導(dǎo)的αvβ3整合素介導(dǎo)的黑色素瘤A375細胞的遷移。并且通過免疫熒光雙標記實驗證實了二者存在共定位的現(xiàn)象。免疫共沉淀的實驗結(jié)果表明c-Abl激酶與αvβ3整合素存在于同一個蛋白復(fù)合體中。通過體外激酶反應(yīng)等實驗發(fā)現(xiàn)c-Abl激酶與αvβ3整合素的相互作用依賴于c-Abl激酶活性的變化;同時c-Abl激酶對

4、αvβ3整合素的調(diào)控不受F-肌動蛋白的影響，c-Abl激酶也沒有參與αvβ3整合素與胞外配體結(jié)合引發(fā)的整合素outside-in的信號通路。
　　利用構(gòu)建的c-Abl激酶幾個不同的與其它蛋白相互作用關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域的GST融合蛋白的體外表達體系，通過GST-pull down實驗證明了c-Abl激酶是通過它的SH3結(jié)構(gòu)域與αvβ3整合素形成復(fù)合體的。還進一步證實c-Abl激酶是通過與talin蛋白直接連接來調(diào)控αvβ3整合素在細胞遷移中