草珊瑚總黃酮的提取及其注射液的研制與應(yīng)用研究.pdf

1、本論文內(nèi)容以貴州地方資源植物草珊瑚為原料，研究草珊瑚有效成分總黃酮的提取分離新技術(shù)、新工藝及新獸藥草珊瑚注射液的研制與應(yīng)用。 1.采取L9(34)正交試驗(yàn)方法，用沸水提取及乙醇浸提，確定了對(duì)草珊瑚總黃酮的最佳提取工藝條件。沸水提取法：即采用1000℃溫度、加水量(固液比)10倍、每次1小時(shí)、提取2次；乙醇提取法：乙醇濃度60％、提取溫度800℃、提取時(shí)間3小時(shí)、提取次數(shù)3次。研究表明，乙醇提取法草珊瑚總黃酮提取量高，其提取率是沸

2、水提取法的3.25倍。 2.在確定了草珊瑚總黃酮最佳提取工藝條件后，對(duì)自然存放時(shí)間不同、采摘季節(jié)不同、部位不同的草珊瑚原料進(jìn)行總黃酮含量的動(dòng)態(tài)變化考察。研究表明：草珊瑚自然存放時(shí)間越長(zhǎng)，總黃酮含量越低，平均每年下降24.74％；不同季節(jié)采摘的草珊瑚其總黃酮含量以秋末冬初(10～12月)最高；經(jīng)對(duì)貴州草珊瑚根、莖、葉中總黃酮的提取測(cè)定表明，草珊瑚葉中總黃酮含量最高，莖中最低。 3.實(shí)驗(yàn)表明，AB-8型大孔吸附樹(shù)脂對(duì)草珊瑚總

3、黃酮靜態(tài)飽和吸附量為126.2mg/g(干樹(shù)脂)，動(dòng)態(tài)飽和吸附量為83.6mg/g(干樹(shù)脂)，總黃酮收率在92％、純度在80％以上。是四種實(shí)驗(yàn)大孔吸附樹(shù)脂中對(duì)草珊瑚總黃酮純化精制最佳樹(shù)脂。洗脫劑為70％乙醇，上柱液pH值以pH4～5時(shí)飽和吸附量最大。隨著溫度升高，樹(shù)脂飽和吸附量減小而解吸率增大，吸附及解吸時(shí)間在1小時(shí)后基本達(dá)到平衡。 4.以蘆丁為對(duì)照品采用分光光度法測(cè)定草珊瑚總黃酮含量，用硝酸鋁-亞硝酸鈉作顯色劑，二者在500n

4、m波長(zhǎng)處有最大吸收。經(jīng)回歸處理得方程：C=84.317A-0.77361(C=ug/ml)，r=0.9997?；厥赵囼?yàn)結(jié)果表明：其加樣回收的平均回收率為98.97％，RSD％=1.85％；樣品液在顯色后1h內(nèi)是穩(wěn)定的。 5.定性試驗(yàn)表明，本研究設(shè)計(jì)的五種方法具有專一性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)迅速，結(jié)果特異性強(qiáng)而明顯，容易觀察，達(dá)到定性鑒別的目的。 6.草珊瑚注射液由草珊瑚全草經(jīng)二步提取(蒸餾、水醇浸提)、分步配伍的生產(chǎn)工藝提取

5、有效成分后精制而成，成品每毫升含有效成分總黃酮不低于5mg。 7.研究表明，草珊瑚注射液中總黃酮含量在存放三年中平均每年降低0.86％；在加熱滅菌后降低0.82％，變化甚微，是非常穩(wěn)定的。強(qiáng)光直射30h可使注射液中總黃酮含量平均下降9.91％，影響較大。注射液的pH值在4～6時(shí)總黃酮含量最高。對(duì)溫度、時(shí)間、pH值等影響注射液穩(wěn)定性因素的研究結(jié)果表明，以pH值變化影響較大。滅菌后注射液pH值平均降低0.67，三年存放中平均每年降低

6、0.16％。在八種常用注射液的附加劑中以硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉對(duì)總黃酮的穩(wěn)定性影響較大，可使總黃酮含量降低12.07％～21.98％。在與26種中草藥注射液的配伍中，與博落回、苦參、黃柏、虎仗、朱砂蓮、地苦膽、十大功勞有配伍禁忌。 8.草珊瑚注射液體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)所試9種細(xì)菌均有不同程度的抑菌效果；其中，對(duì)禽巴氏桿菌、豬丹毒桿菌、雞白痢沙門(mén)氏菌、金色葡萄球菌、大腸桿菌等有較好的體外抑菌作用，對(duì)禽巴氏桿菌的MIC在7.81m

7、g/mL-15.63mg/mL；對(duì)大腸桿菌、豬丹毒桿菌、金色葡萄球菌的MIC在15.63mg/mL。 9.草珊瑚注射液對(duì)小白鼠及家兔采用腹腔注射給藥，小白鼠LD50為38.9g/kg；小白鼠對(duì)本品的最大耐受量是豬用劑量的150倍；兔對(duì)本品的最大耐受量是豬用劑量的133倍(均按體重計(jì))。急性毒性試驗(yàn)動(dòng)物仔豬、山羊、黃牛、雞無(wú)一發(fā)病或死亡，剖檢雞及部分山羊、仔豬其主要器官(心、肝、脾、肺、腎等)均未見(jiàn)有眼觀病理變化。試驗(yàn)結(jié)果表明本品

8、對(duì)動(dòng)物安全。 10.提取草珊瑚有效成分后配伍制成注射液用以治療家畜流行性感冒、風(fēng)濕痹癥、胃腸炎、仔豬白痢、禽霍亂等疾病，平均治愈率為93.3％；對(duì)豬流行性感冒的對(duì)比治療試驗(yàn)其治愈率比青霉素、安乃近、病毒靈對(duì)照組高出21個(gè)百分點(diǎn)；對(duì)仔豬下痢的對(duì)比治療試驗(yàn)其治愈率比青霉素、鏈霉素對(duì)照組高出25個(gè)百分點(diǎn)、比氟哌酸對(duì)照組高出12個(gè)百分點(diǎn)。 11.經(jīng)濟(jì)效益分析表明草珊瑚注射液項(xiàng)目投資收益率54.45％；投資回收期3.5年～4.5年