富鉻釀酒酵母的單倍體原生質體復合誘變育種及其生物學功能研究.pdf

1、鉻是人體必需的微量營養(yǎng)元素之一，是人體內葡萄糖耐量因子(glucosetolerancefactor，GTF)的重要組成成分。人體缺鉻會產(chǎn)生葡萄糖、脂肪、蛋白質代謝障礙，引起各種疾病，如動脈粥樣硬化、糖尿病、冠心病、末梢神經(jīng)炎、近視眼等；動物缺鉻則表現(xiàn)為膽固醇或血糖升高、生長遲緩、免疫力下降、繁殖能力下降和壽命縮短等，補鉻后，癥狀消失(AndersonRA，1997)。由于不同形式的鉻在組織中的結合程度不同，導致吸收率不同。無機鉻不但毒

2、性大，且吸收水平極低，約為0.14％-3.0％；有機鉻吸收迅速且安全，吸收率可達10％-25％. 在有機鉻制劑中，富鉻酵母具有生物活性高、毒性小、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點，尤其是作為預防和治療糖尿病藥物的重要功效成分已引起人們極大重視。同時，酵母本身的生物活性物質對生物體也有保健作用。普通釀酒酵母富集鉻的能力非常有限，本實驗旨在通過原生質體復合誘變選育富鉻能力遠高于普通釀酒酵母的新型誘變菌株，以應用于生產(chǎn)。 以釀酒酵母(Sacc

3、haromycescerevisiae)SY8二倍體為出發(fā)菌株，通過單倍體分離，液體抗性水平檢測，獲得了釀酒酵母單倍體抗性菌株SY8-6(Cr3+抗性5mmol/L)。以蝸牛酶酶解SY8-6菌株制備其原生質體，原生質體形成優(yōu)化條件為：0.8mol/LNaCl，1.5％蝸牛酶，酶解45min，0.3％β-巰基乙醇。 對SY8-6菌株的原生質體進行紫外線誘變，紫外燈功率為30W，工作距離30cm，最佳照射時間為50s。通過液體抗性水

4、平檢測獲得了1株誘變菌株SY8-6-4(Cr3+抗性10mmol/L)，其拮抗CrCl3濃度為出發(fā)菌株的2倍。 將SY8-6-4菌株再次進行原生質體微波復合誘變，微波源為2450MHz，功率為850W，最佳照射時間為80s。通過液體抗性水平檢測獲得了1株復合誘變菌株SY8-6-4-29(Cr3+抗性20mmol/L)，其拮抗CrCl3濃度是出發(fā)菌株的4倍。在非重金屬選擇壓力下，50世代的遺傳穩(wěn)定性檢測表明，誘變菌株SY8-6-4