高產(chǎn)酒率釀酒酵母單倍體的分離與雜交育種.pdf

1、本文在篩選獲得一批酒精發(fā)酵力較強(qiáng)的二倍體釀酒酵母(Sacchromycescerevisiae)菌株的基礎(chǔ)上，優(yōu)化產(chǎn)孢條件，應(yīng)用篩選獲得的高產(chǎn)酒精的單倍體菌株，經(jīng)雜交育種構(gòu)建高產(chǎn)釀酒酵母菌株。 以二倍體菌株ZJD3-3、ZJD3-4、ZJD3-7、ZJD3-9和ZJD3-11(稱為ZJD3系列)及非整倍體菌株C19為實(shí)驗(yàn)菌株，經(jīng)對(duì)產(chǎn)孢培養(yǎng)基的優(yōu)選，確認(rèn)McClary產(chǎn)孢培養(yǎng)基為適宜的高產(chǎn)孢率培養(yǎng)基。在該培養(yǎng)基上經(jīng)25℃、7天培養(yǎng)

2、，釀酒酵母的產(chǎn)孢率可達(dá)到47％。對(duì)ZJD3系列二倍體菌株進(jìn)行單倍體分離，獲得單倍體71株。對(duì)篩選所得單倍體菌株，以及實(shí)驗(yàn)室原有單倍體菌株c36、c36-8、c36-9進(jìn)行交配型和發(fā)酵性能測(cè)定，交配型為a型的單倍體與交配型為a的單倍體數(shù)目差異較大。得交配型a的單倍體菌株30株，交配型a的單倍體菌株18株。從中篩選獲得發(fā)酵性能較強(qiáng)的單倍體菌株4株，其中l(wèi)株為a型，3株為僅型，發(fā)酵性能最強(qiáng)的ZS-5菌株其同等條件下酒精發(fā)酵后的酒度高出二倍體親

3、株4.5％。 以得到的4株強(qiáng)發(fā)酵菌株和單倍體菌株c36、c36-8、c36-9以及非整倍體菌株C19為雜交親株，分別進(jìn)行群體雜交，發(fā)現(xiàn)不同交配型單倍體混合2h后開始出現(xiàn)啞鈴型細(xì)胞，平板分離培養(yǎng)48h后，經(jīng)鑒定共獲得雜合子124株，經(jīng)酒精發(fā)酵測(cè)驗(yàn)，從中篩選獲得發(fā)酵性能優(yōu)良的酵母菌株6株。結(jié)果表明，95％以上的雜合子酒精發(fā)酵性能優(yōu)于雜交親株，最優(yōu)者比雜交單倍體親株提高17.7％，比原始二倍體菌株高15.5％。經(jīng)雜交育種與重復(fù)酒精發(fā)酵