hADSCs肝樣分化、標(biāo)記及Caveolin-1在分化中的作用.pdf

1、終末期肝病是由多種急慢性肝病導(dǎo)致的臨床綜合征。應(yīng)用干細(xì)胞再生產(chǎn)生正常肝細(xì)胞代謝功能的“肝臟組織”，進(jìn)行體外支持或體內(nèi)植入，可以解決肝臟來源的疑難。
　　 脂肪間充質(zhì)細(xì)胞(ADSCs)作為自體細(xì)胞移植的種子細(xì)胞在再生醫(yī)學(xué)中發(fā)揮著重要作用。由于能在體外培養(yǎng)穩(wěn)定擴(kuò)增，并在體內(nèi)和體外分化成為肝細(xì)胞，ADSCs可以作為自體干細(xì)胞治療肝臟疾病的種子細(xì)胞。
　　 Caveolin-1(窖蛋白-1，Cav-1)是組成胞膜窖的主要功能蛋白

2、。由于在脂滴和新生細(xì)胞膜的形成以及肝再生的能量供應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，因此是Cav-1肝再生所必需的蛋白。然而，Cav-1是否參與并影響ADSCs向肝細(xì)胞分化這一過程尚不明確。
　　 目的：本論文以人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用生長因子聯(lián)合誘導(dǎo)技術(shù)建立肝樣細(xì)胞模型，通過檢測(cè)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)過程中Cav-l蛋白的表達(dá)，初步探討Cav-1在肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的作用及介導(dǎo)的相關(guān)信號(hào)途徑，旨在了解干細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的機(jī)制。

3、
　　 方法：l、分離、提取及培養(yǎng)人源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞并鑒定其性質(zhì)。2、通過HGF、bFGF、EGF和Dex聯(lián)合誘導(dǎo)，免疫熒光及RT-PCR方法對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3、體外MR評(píng)估自合成SPIO作為干細(xì)胞移植的MR活體內(nèi)示蹤的安全性和有效性。4、WesternBlot方法檢測(cè)不同誘導(dǎo)時(shí)期肝樣細(xì)胞中Cav-1、ER-α36及MAPK信號(hào)通路蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：l、分離提取了hADSCs，通過性質(zhì)的鑒定表明，提取的hAD

4、SCs較為原始，干性強(qiáng)，具有多項(xiàng)分化的能力。2、生長因子聯(lián)合誘導(dǎo)建立了肝細(xì)胞樣模型，發(fā)現(xiàn)隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長，干性基因Oct4、Nanog表達(dá)量逐漸減少；ALB、CYPlAl、HNFlA、HNFlB等基因表達(dá)量逐漸增多；AFP表達(dá)先增高再降低。說明干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞分化誘導(dǎo)成功。3、自合成SPIO對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記，在25μg/mL濃度時(shí)細(xì)胞的增殖水平正常，且在MR檢測(cè)上具有顯著性差異。4、在hADSCs肝樣分化的過程中Cav-1蛋白和M