Caveolin-1調(diào)節(jié)大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞接觸性抑制在肝肺綜合征中的作用研究.pdf

1、目的:
　　肝-肺綜合癥(Hepatopulmonary syndrome，HPS)是臨床上一種危重的并發(fā)癥，主要包括晚期肝病、低氧血癥和肺內(nèi)血管擴張(intrapulmonary vasodilatation，IPVD)等特征。其中肝硬化病人合并HPS占其總數(shù)的32％，明顯增加其死亡率。到現(xiàn)在為止，HPS發(fā)生發(fā)展的具體機制尚未研究清楚，肝移植仍然是唯一有效的治療措施。多種因素參與HPS的發(fā)病機制。其中肺微血管擴張促進肺微血管重塑

2、和低氧血癥。而PMVECs接觸抑制減弱和增殖可能在HPS肺微血管擴張中發(fā)揮了重要作用。嚴重肝病致大量細胞因子如內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)，腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等釋放入血循環(huán)中，激活或增加引起肺微血管內(nèi)皮增殖相關(guān)的信號通路中的相關(guān)蛋白的表達。然而HPS血清刺激的PMVECs接觸性抑制作用發(fā)生顯著減弱變化的機制尚不清楚。Caveolin-1是細胞膜表面上的重要結(jié)

3、構(gòu)和功能蛋白，在caveolin-1的N端存在一個特殊CSD結(jié)構(gòu)域，這個CSD結(jié)構(gòu)域能綁定多個信號蛋白調(diào)節(jié)細胞黏附、增殖、遷移及凋亡，但是Caveolin-1在慢性膽總管結(jié)扎(common bile duct ligation，CBDL)大鼠血清誘導(dǎo)PMVECs接觸抑制減弱，促進其增殖的機制仍然不明確。我們在前期實驗過程中病理解剖CBDL大鼠肺臟發(fā)現(xiàn)其肺部微血管發(fā)生增厚、明顯擴張的表現(xiàn)。而用HPS大鼠血清刺激的PMVECs出現(xiàn)復(fù)層增長的

4、趨勢，同時其接觸性抑制作用減弱。目前，在研究接觸性抑制作用較多集中在腫瘤研究方面。而ve-cadherin作為細胞間黏附體結(jié)構(gòu)的重要組成部分在接觸性抑制方面發(fā)揮了重要的作用。Caveolin-1是細胞膜上多種信號通路如增長、凋亡等的樞紐中心，它能通過相關(guān)的信號通路調(diào)節(jié)細胞間黏附結(jié)構(gòu)體的穩(wěn)定性，最終對細胞接觸性抑制進行調(diào)控。于是我們假設(shè)caveolin-1調(diào)節(jié)PMVECs接觸性抑制大鼠在HPS的發(fā)展有可能發(fā)揮重要的作用。本實驗?zāi)康脑谟谘芯?/p>

5、HPS大鼠血清誘導(dǎo)下大鼠PMVECs發(fā)生接觸性抑制作用減弱及探索caveolin-1調(diào)節(jié)HPS大鼠血清誘導(dǎo)的大鼠PMVECs接觸性抑制作用減弱的機制。膽總管結(jié)扎術(shù)后膽汁性肝硬化門靜脈高壓癥誘導(dǎo)大鼠HPS的形成，然后，提取其血清刺激PMVECs，檢測其黏附指數(shù)及caveolin-1和ve-cadherin的表達，探索HPS的發(fā)病機制。
　　方法:
　　實驗分為三部分
　　1.建HPS大鼠模型，收集血清。
　　CBD

6、L法構(gòu)建HPS大鼠模型，建模成功的標準為其腹主動脈血血氣分析PaO2＜85mmHg(1 mmHg=0.133kPa)且A-aDO2＞18 mmHg，術(shù)后2周收集其血清。
　　2.檢測HPS大鼠血清對正常SD(Sprague Dawley, SD)大鼠PMVECS接觸性抑制作用的影響。
　　用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)PMVECs。正常SD大鼠（1月齡），取肺，用生理鹽水灌注后剪下其邊緣1 cm組織行PMVECs原代培養(yǎng)、純化及鑒定

7、。將第4-9代PMVECs隨機分成2組:HPS干預(yù)組（HPS組）和對照組（C組），于12、24和36h(T1、T2、T3)時間點，用CCK-8法分別檢測PMVECs的黏附指數(shù)和增殖情況。
　　3.于12、24和36h(T1、T2、 T3)時間點用Western blot法分別檢測HPS組和C組中caveolin-1和ve-cadherin蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1).HPS大鼠模型構(gòu)建成功，其取其腹主動脈血氣分析

8、示PaO2＜85mmHg且A-aDO2＞18 mmHg并成功收集其HPS鼠血清。
　　2).原代PMVECs培養(yǎng)成功，HPS大鼠血清降低細胞間的黏附指數(shù)，使PMVECs接觸抑制作用減弱，增殖能力增高。
　　3).與C組比較，HPS組在T1、T2、T3時相點PMVECs中的caveolin-1和ve-cadherin蛋白表達均下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.PMVECs在HPS大鼠血清的刺激下，其細胞間黏附指數(shù)下降提示