TLR4-PI3K信號(hào)相關(guān)分子在氣道上皮細(xì)胞誘導(dǎo)的哮喘氣道平滑肌細(xì)胞遷移中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘)是由多種細(xì)胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病,氣道重構(gòu)和氣道炎癥是哮喘的特征性病理改變。氣道重構(gòu)是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié),但其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確。支氣管上皮作為氣道內(nèi)的物理屏障,當(dāng)其受到各種損傷因素作用后,不僅其屏障及保護(hù)作用減退,還會(huì)釋放TNF-a、RANTES、IL-8等多種細(xì)胞因子,誘導(dǎo)氣道平滑肌細(xì)胞(Airway smooth muscle cells,ASMCs)跨膜遷移,在哮喘氣道重構(gòu)中發(fā)揮重要作用

2、。Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)和磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-Kinases,PI3K)參與多種疾病過(guò)程,與哮喘密切相關(guān)。
　　我們擬觀察氣道上皮細(xì)胞在基礎(chǔ)狀態(tài)及干預(yù)狀態(tài)下的分泌功能,檢測(cè)其對(duì)哮喘ASMCs跨膜遷移功能的影響,進(jìn)而更科學(xué)、全面的評(píng)價(jià)哮喘狀態(tài)下ASMCs的功能變化,通過(guò)使用抗TLR4抗體、渥曼青霉素和二硫代氨基吡咯烷(PDTC)干預(yù),以探討TLR4/PI3

3、K相關(guān)信號(hào)分子在氣道上皮細(xì)胞誘導(dǎo)的ASMCs遷移功能中的作用。同時(shí),通過(guò)建立哮喘大鼠模型,我們嘗試探討傳統(tǒng)中藥合劑小青龍湯對(duì)哮喘TLR4、p-Akt表達(dá)及ASMCs遷移的影響,以尋找哮喘治療的新藥物。
　　方法:我們將建立大鼠哮喘模型,分離哮喘氣道平滑肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),并取肺組織,用圖象分析軟件測(cè)量氣道壁厚度,使用免疫組織化學(xué)、ELISA、改良Boyden小室等方法,用TNF-α、抗TLR4抗體、渥漫青霉素、PDTC和小青龍湯等

4、作為工具藥,探討哮喘狀態(tài)下TLR4/PI3K信號(hào)相關(guān)分子在哮喘氣道上皮誘導(dǎo)的氣道平滑肌細(xì)胞遷移中的作用及其機(jī)制。
　　結(jié)果:
　?、排c正常對(duì)照組相比,各濃度TNF-a組IL-8和RANTES的分泌水平顯著增加(P<0.01)。
　?、婆c正常對(duì)照組相比,TNF-a組RTE培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)ASMCs跨膜遷移水平顯著增高(P<0.01),并與上清液中IL-8和RANTES的變化水平趨勢(shì)相一致。
　　⑶與正常對(duì)照組相比,T

5、NF-α+抗TLR4抗體組、TNF-α+渥漫青霉素組和TNF-α+PDTC組ASMCs跨膜遷移水平顯著減低(P<0.01)。
　　⑷與TNF-α+渥漫青霉素組相比,TNF-α+渥漫青霉素組+PDTC組ASMCs跨膜遷移水平顯著降低(P<0.05)。
　　⑸與正常對(duì)照組相比,哮喘4周組、哮喘8周組、小青龍湯4周組和8周組大鼠的管壁面積、平滑肌面積較正常對(duì)照組均顯著增大(P<0.01),平滑肌距基底膜的距離顯著減小(P<0.01

6、)。
　?、逝c哮喘8周組相比,哮喘4周組、小青龍湯4周的管壁面積和平滑肌面積顯著減小,平滑肌距基底膜的距離顯著增大(P<0.05)。
　?、伺c哮喘4周組和哮喘8周組相比,小青龍湯8周組的管壁面積明顯減小,平滑肌距基底膜的距離明顯增大(P<0.05)。
　?、膛c正常對(duì)照組相比,哮喘4周組、哮喘8周組、小青龍湯4周組和小青龍湯8周組TLR4和p-Akt的表達(dá)量顯著增高(P<0.01)。
　?、团c哮喘8周組相比,哮喘4

7、周組、小青龍湯4周組和小青龍湯8周組TLR4和p-Akt的表達(dá)量顯著降低(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　?、?TNF-a可誘導(dǎo)哮喘氣道上皮細(xì)胞分泌IL-8和RANTES等多種細(xì)胞因子和趨化因子,并與濃度有一定的相關(guān)性,從而參與哮喘的氣道炎癥和氣道重構(gòu)。
　?、葡瓪獾郎掀ぜ?xì)胞可能通過(guò)分泌IL-8、RANTES等多種細(xì)胞因子作用于ASMCs,引起細(xì)胞的跨膜遷移。
　?、?TLR4、PI3K和NF-κB可能參與哮喘