GDF-5在軟骨細(xì)胞再分化中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察體外傳代過(guò)程中C57小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞去分化現(xiàn)象，GDF5作用于已去分化的軟骨細(xì)胞，使其再分化。兔軟骨細(xì)胞三維培養(yǎng)，GDF5誘導(dǎo)后修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)缺損，行檢測(cè)進(jìn)一步證明GDF5的作用。初步研究MiRNA-145在軟骨再分化中的作用機(jī)制。
　　方法:新生C57小鼠膝關(guān)節(jié)分離獲取原代軟骨細(xì)胞傳代至P7代，對(duì)P1、P4代和GDF5誘導(dǎo)的P4代細(xì)胞從形態(tài)、增殖、基質(zhì)分泌以及基因和蛋白表達(dá)等方面采用顯微鏡觀察，CCK-8增殖曲線測(cè)定、細(xì)

2、胞阿利辛藍(lán)染色、qRT-PCR及Western Blot進(jìn)行比較。將不同實(shí)驗(yàn)組的兔軟骨細(xì)胞與PLGA/CHI絡(luò)合物支架結(jié)合7天后修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)缺損，三月后取材，行HE、阿利辛藍(lán)、Col2免疫組化染色等檢測(cè)。將MiRNA-145的模擬劑和抑制劑轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，檢測(cè)胞內(nèi)SOX9水平。
　　結(jié)果:C57小鼠及兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞傳代過(guò)程中形態(tài)發(fā)生變化;P4代細(xì)胞增殖能力較P1代稍減弱，P7代無(wú)明顯增殖;P1代胞外基質(zhì)分泌量高于P4代，而P4代經(jīng)GD

3、F5誘導(dǎo)7天后表達(dá)量有所上升;P4代細(xì)胞相關(guān)特性分子(SOX9、ColⅡ和Aggrecan等)mRNA及蛋白表達(dá)水平較P1代下調(diào)，經(jīng)GDF5誘導(dǎo)后表達(dá)水平回升; PLGA/CHI支架的細(xì)胞毒性低且細(xì)胞可均勻分布材料各層。P4細(xì)胞/材料GDF5誘導(dǎo)組修復(fù)缺損效果介于P1細(xì)胞/材料組和P4細(xì)胞/材料組之間;抑制MiRNA-145可增強(qiáng)SOX9的表達(dá)，反之亦然。
　　結(jié)論:體外培養(yǎng)的P4代軟骨細(xì)胞出現(xiàn)較明顯的去分化現(xiàn)象，經(jīng)一定濃度(30