HCMV可上調(diào)TLR2及炎癥因子的表達及其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、目的：
　　1.通過檢測HCMV的IE1-72及IE1-86在結(jié)直腸癌、癌旁正常組織及結(jié)腸腺瘤中的表達情況，明確HCMV感染與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　2.進一步檢測TLR2、TLR4及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達情況，找出其中的規(guī)律及與HCMV的IE1表達的相關(guān)性。
　　3.根據(jù)TLR2、TLR4及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達情況分析各因子的臨床意義，探討各炎癥因子在腫瘤微環(huán)境中的作用

2、。
　　4.HCMV感染結(jié)腸癌SW480細胞系，檢測IE1、TLR2、TLR4及下游炎癥因子的表達情況，探討TLRs信號通路在HCMV感染過程中的作用。
　　方法：
　　1.收集56例結(jié)直腸癌組織，以癌旁正常腸粘膜組織及36例結(jié)腸腺瘤組織為對照，應(yīng)用RT-PCR法及免疫組化ABC法分別檢測IE1-72、IE1-86、TLR2、TLR4、NF-ΚB及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達，進行定性及定量分析。

3、　　2.進一步分析TLR2、TLR4、 NF-ΚB及炎癥因子IL-6、IL-8及TNFα的表達與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。
　　3.建立 HCMV感染的結(jié)腸癌 SW480細胞系模型，應(yīng)用 qRT-PCR法及Western-blot法檢測感染前（0小時）、感染后6小時、12小時、24小時、48小時及72小時各時間IE1、TLR2、TLR4、NF-ΚB及IL-6、IL-8mRNA及蛋白表達的變化，應(yīng)用進行定性及定量分析。
　　結(jié)果：

4、
　　1.結(jié)直腸癌組織中HCMV的IE1-72及IE1-86mRNA表達量均明顯高于癌旁正常組織，P<0.05。癌組織中IE1-72蛋白的表達率達44.6％，結(jié)腸腺瘤的表達率達41.7%，均明顯高于癌旁正常組織12.5%，P<0.05。
　　2.結(jié)腸癌組織 TLR2mRNA及蛋白的表達顯著高于癌旁正常組織，69.6%vs42.8%，P<0.05，癌組織中TLR4蛋白的表達顯著高于正常組織73.2%vs35.7%，P<0.05

5、。36例結(jié)腸腺瘤組織中TLR2及TLR4mRNA及蛋白的的表達量高于也于正常組織，但無統(tǒng)計學(xué)差異，P>0.05。癌組織中TLR2及TLR4的表達與IE1-72蛋白的表達有正相關(guān)性。
　　3.NF-ΚBmRNA及蛋白在結(jié)直腸癌組織的表達略高于癌旁正常組織，P>0.05；TNFα、IL-6及IL-8的蛋白表達在癌組織中均顯著高于正常組織，P<0.05；癌組織中IL-6及TNFα mRNA水平高于正常組織，P<0.05。在各因子與患者的

6、臨床病理特征的相關(guān)分析中發(fā)現(xiàn)，TLR2、TLR4、TNFα、IL-6及IL-8蛋白的表達均不同程度的與臨床不良預(yù)后如脈管陽性、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化及分期晚等有關(guān)。
　　4.SW480細胞系感染HCMV后，從6小時開始通過對細胞形態(tài)學(xué)觀察、IE1-72及IE1-86基因轉(zhuǎn)錄表達，成功建立SW480細胞株的HCMV體外感染模型。
　　5.感染后6小時SW480細胞就開始少量表達IE1-72及IE1-86，并隨著感染時間的延長表

7、達逐漸增加，致48小時達峰值，72小時后似乎有下降趨勢。
　　6.TLR2在感染前有少許表達，自感染后6小時就開始表達增加，并隨著感染時間的延長表達逐漸增加，致48小時達峰值。而TLR4在感染前后表達水平隨時間無明顯變化。
　　7.NF-ΚB在感染前后表達水平隨時間無明顯變化；IL-6及IL-8在感染前基本無表達，IL-6自感染后6小時開始似有表達，并隨著感染時間的延長表達逐漸增加。在感染前基本無表達，自感染后12小時就開始