MRPL35蛋白在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中作用的初步研究.pdf

1、背景及目標(biāo):
　　線粒體核糖體蛋白（MRPs）于胞漿合成并經(jīng)靶向輸送至線粒體后，組裝為線粒體核糖體，參與線粒體蛋白的翻譯過程。相關(guān)的研究表明，MRPs在多種惡性腫瘤中的表達(dá)出現(xiàn)異常。我們前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌細(xì)胞中MRPL35的表達(dá)水平上調(diào)，本文將初步分析MRPL35在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　1.收集2005-2006年的151例結(jié)直腸癌患者的組織蠟塊，制作組織芯片，通過免疫組化檢測MRPL35的

2、表達(dá)；分析26對結(jié)直腸癌患者組織中MRPL35 mRNA和蛋白的表達(dá)水平；運(yùn)用Kaplan–Meier方法繪制生存曲線；對變量進(jìn)行單因素/多因素COX回歸分析，篩選獨(dú)立預(yù)后因素。
　　2.熒光定量PCR和Western blot檢測結(jié)直腸癌及癌旁組織以及4種結(jié)直腸癌細(xì)胞中MRPL35 mRNA和蛋白水平的表達(dá)。慢病毒介導(dǎo)的RNAi敲低細(xì)胞中MRPL35的表達(dá)水平，分別采用MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞術(shù)的方法，觀察MRPL3

3、5對細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的作用。
　　結(jié)果：
　　1.組織芯片結(jié)果顯示MRPL35主要在胞漿表達(dá)，且結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織（P<0.05）。MRPL35的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期以及病理類型呈正相關(guān)（P<0.05），與病人術(shù)后生存期呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　2.qPCR及Western blot結(jié)果顯示癌組織中MRPL35的表達(dá)水平高于癌旁組織（P<0.05）；4種結(jié)直腸癌細(xì)胞中M

4、RPL35表達(dá)水平均高于正常結(jié)直腸粘膜細(xì)胞FHC。
　　3.RNAi敲低HCT116和SW480細(xì)胞的MRPL35，感染5天后，HCT116細(xì)胞的增殖能力減弱85％左右，SW480細(xì)胞的增殖能力減弱71％左右。HCT116細(xì)胞的凋亡率增加72％，SW480細(xì)胞的凋亡率增加100％。HCT116和SW480的細(xì)胞周期停滯在G2/M期。
　　結(jié)論：
　　MRPL35促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖，其表達(dá)水平升高與患者術(shù)后生存期有密切