自體骨髓干細胞移植治療肝功能不全臨床觀察.pdf

1、研究背景： 肝臟疾患是影響人類生活質量和生命健康的重要疾病之一，這些疾病都將逐漸發(fā)展，演變?yōu)楦卫w維化或肝硬化，最終出現(xiàn)肝臟功能衰竭。對于各種類型的終末期肝病，肝移植在理論上應該為最理想的治療選擇。但由于供體缺乏及保存供體的時間限制的原因，很多病人在等待肝移植的過程中即死亡。 生物人工肝系統(tǒng)能使終末期肝病病人橋接肝移植。肝細胞具有強大的再生能力，臨時應用生物人工肝系統(tǒng)也可以解決急性肝功能的失代償，促進肝細胞再生，肝功能可以

2、暫時恢復，爭取到等待肝移植的時間。經(jīng)過幾十年的研究，生物人工肝系統(tǒng)巳從非生物型、生物型人工肝系統(tǒng)發(fā)展到混合型人工肝系統(tǒng)，國內外已經(jīng)有不少種類的人工肝系統(tǒng)應用于臨床。但如何獲得高質量、來源豐富的生物人工肝用肝細胞是當前面臨的最大問題。 由于肝臟移植的供體短缺、術后的免疫排斥以及昂貴的治療費用等問題嚴重制約了肝臟移植的廣泛應用；生物人工肝由于肝細胞來源局限以及生物安全性等因素而受到限制。尋求一種相對簡便、安全有效、費用低廉的替代治療

3、方案成為臨床迫切需要解決的問題。目前干細胞移植成為研究的熱點，由于終末期肝病患者自身肝細胞已極度破壞，僅存的肝細胞不能維持自身的生理功能從而需要臨床治療。而同種異體和異種肝細胞移植由于受免疫排斥、動物源性傳染病、倫理等方面的制約而不能應用于臨床。目前干細胞的研究已在醫(yī)學領域取得令人矚目的成就，也為廣大臨床工作者開拓了新的思路，利用細胞移植治療肝病成為新的熱點，但基礎研究的報道很多，臨床研究僅北京等極少數(shù)地區(qū)報道有成功病例。干細胞的發(fā)現(xiàn)為

4、解決肝細胞源短缺的問題提供了很好的思路。1999年以來國外學者相繼提出：骨髓干細胞能夠在鼠肝內轉化為肝卵圓細胞甚至成熟的肝細胞和膽管細胞。Verfaillie等研究表明從大鼠、小鼠和人的骨髓中分離得到多能成年祖細胞(multi-potent adult progenitor cells，M A P C s)，該細胞體外經(jīng)F G F4和H G F誘導可分化為功能肝細胞，此細胞能合成尿素、白蛋白、糖原，具有細胞色素P 450活性，能吸附α低

5、密度脂蛋白。將這一亞群細胞移植至肝臟，用綠色熒光蛋白和白蛋白雙標技術可證實其已經(jīng)分化為功能完備的肝細胞。以色列的科學家發(fā)現(xiàn)：當肝臟遇到損害時，它會產生大量的信號分子來誘導骨髓干細胞轉移和分化，修復受到損害的肝臟細胞。 總結國內外的大量基礎研究可以證實：骨髓中存在內分化為肝細胞的干細胞，將骨髓中的干細胞移植到肝臟后在肝臟特定的微環(huán)境內可橫向分化成有功能的肝細胞。我們的前期研究亦證實：體內、體外骨髓干細胞均可橫向分化為有生物學功能的

6、肝細胞，稱為可塑性，結合國內外的研究成果我們總結出自體骨髓干細胞在組織再生方面具有特定的優(yōu)勢：①完全是自身的遺傳背景，不受細胞來源和移植免疫或排斥的限制；②成人組織干細胞的分化潛能相對比較局限，更容易誘導向特定的組織細胞分化，也可直接用于體內組織的原位修復；③無倫理學方面的困擾，更易于臨床應用。目前國內外學者亦開始自體骨髓干細胞移植的研究，其中骨髓干細胞移植治療心肌梗死及神經(jīng)系統(tǒng)疾病亦屢見成功報道，肝病治療方面北京軍區(qū)總醫(yī)院報道經(jīng)肝動脈

7、骨髓干細胞移植治療肝硬化20例，其中14例有效、6例無效。 本研究在課題組前期理論研究及動物體外、體內研究的基礎上，嚴格選擇臨床適應病例，術后監(jiān)測生化指標及觀察臨床癥狀判斷治療效果，為臨床大規(guī)模開展自體骨髓干細胞移植奠定基礎。第一章人骨髓干細胞的分離目的：建立簡便安全的自體骨髓干細胞分離方法，同時檢驗分離所得細胞的存活率、有無細菌感染等。 方法：應用密度梯度離心法分離人骨髓干細胞，臺盼蘭染色檢驗細胞的存活率，實驗室細菌學

8、檢驗判斷有無細菌感染。 結果：密度梯度離心法能分離出純度較高的HMSCs，臺盼蘭染色顯示細胞存活率在95％以上，細菌學檢驗無細菌感染。 結論：應用密度梯度離心法可得到純度較高的HMSCs，細胞存活率在95％以上且無細菌感染。 第二章自體骨髓干細胞移植治療肝功能不全的臨床研究。目的：探索自體骨髓干細胞移植對肝功能不全患者的治療效果，為干細胞移植的臨床大規(guī)模開展提供基礎。 方法：我們選擇了6例肝功能不全患者均

9、來源于我所住院患者，年齡在44～69歲；患者在無菌條件下，從骼后上棘抽取骨髓50 ml，分離純化骨髓干細胞。在局部麻醉下，行肝動脈介入將分離的骨髓干細胞移植于肝臟；患者在移植后不同時間，1周、2周、4周、8周、12周進行肝功能檢測；觀察在移植后不同時間癥狀改善情況及術后的不良反應情況。 結果：我們發(fā)現(xiàn)在移植12周后，我們觀察了患者在干細胞移植前后不同時間肝功能的變化，發(fā)現(xiàn)患者在移植1周，2周，4周，8周，12周后，谷丙轉氨酶(A

10、LT)逐漸降低，由平均98.4 IU/L降至41.5 IU/L；總膽紅素(TB IL)由平均136.5mol/L降至78.4 mol/L；肌酐由112.3降至72.1；白蛋白(ALB)逐漸升高，由平均23.3 g/L升至32.6 g/L；凝血酶原時間(PT)下降不明顯。我們進一步觀察了自體骨髓干細胞移植后患者的生存情況發(fā)現(xiàn)，患者在移植12周生存率為100％；1例在7個月后死亡。我們觀察了在自體骨髓干細胞移植后患者癥狀的變化，發(fā)現(xiàn)移植后大