TNF-α促進(jìn)HepG2肝細(xì)胞脂質(zhì)積聚及其機(jī)制初探.pdf

1、目的:探討腫瘤壞死因子-α是否能夠促進(jìn)HepG2肝細(xì)胞脂質(zhì)積聚，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法:將HepG2肝細(xì)胞分為空白對(duì)照組、單純TNF-α組（TNF-α2 ng/mL或20 ng/mL）、軟脂酸組（PA0.08 mM或0.2 mM）及聯(lián)合組（TNF-α2 ng/mL聯(lián)合PA0.08 mM、TNF-α2 ng/mL聯(lián)合PA0.2 mM、TNF-α20 ng/ mL聯(lián)合PA0.08 mM或TNF-α20ng/ mL聯(lián)合PA0

2、.2mM)，處理24 h，應(yīng)用化學(xué)酶促-比色法定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG含量。進(jìn)一步選取TNF-α20 ng/mL和軟脂酸0.08 mM，通過(guò)油紅O染色觀(guān)察HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚情況;熒光定量PCR檢測(cè)HepG2細(xì)胞SREBP-1、FAS、ACCα的mRNA表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)mTOR、S6K磷酸化水平以及SREBP-1、FAS、ACCα的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:①單純TNF-α刺激(2 ng/ml、20 ng/ml

3、)增加HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚(P＜0.05); TNF-α與軟脂酸聯(lián)合處理顯著增加胞內(nèi)TG含量(P＜0.05);0.2 mM軟脂酸處理也使胞內(nèi)TG含量輕度增加(P＜0.05)，而0.08 mM軟脂酸對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)的TG水平?jīng)]有影響。②油紅O染色進(jìn)一步顯示，TNF-α促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚。③定量PCR和Western blot結(jié)果顯示，單純TNF-α組與空白對(duì)照組相比，HepG2細(xì)胞SREBP-1、FAS、ACCα的mRNA和蛋白表達(dá)均增加

4、(P＜0.05);聯(lián)合組與軟脂酸組相比，肝細(xì)胞內(nèi)SREBP-1、FAS、ACCα的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)(P＜0.05)。④Western blot顯示，單純TNF-α組與空白對(duì)照組相比，HepG2細(xì)胞mTOR、S6K磷酸化水平升高(P＜0.05);聯(lián)合組與軟脂酸組相比，mTOR、S6K磷酸化水平明顯上調(diào)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:TNF-α促進(jìn)HepG2肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚，上調(diào)mTOR、S6K磷酸化水平以及SREBP-1