人TNF-β基因轉染HepG2細胞對Survivin表達的影響.pdf

1、目的：脂質體介導人TNF-β基因轉染人肝癌細胞HepG<,2>，檢測TNF-β的表達，并同時檢測、分析轉染后HepG<,2>細胞中Survivin的表達。 方法：用本實驗室已成功制備的TNF-β真核細胞表達質粒pcDNA4C-TNF-β cDNA及其轉化的E．coliJM-109感受態(tài)大腸桿菌，經質粒提取后，以脂質體為中介轉染培養(yǎng)的人肝癌細胞HepG2，同時設立對照組(未轉染組)。分別于轉染后12h，24h，48h，72h和5d

2、收集HepG2細胞及細胞上清液。取細胞上清液用EuSA法檢測TNF-β表達。將收集的細胞充分裂解，取細胞裂解上清液用ELISA法檢測Survivin表達。繪制標準曲線，JMTJFX 10.32統(tǒng)計分析軟件進行相關統(tǒng)計檢驗。 結果：轉染后，ELlSA法成功檢測到轉染組中TNF-β的表達，繪制標準曲線，相關系數r=0.991，TNF-β的表達量24h最高，5d最低。同時檢測到對照組中Survivin的表達，繪制標準曲線，相關系數r=

3、0.985。對照組中Survivin的表達量24h最高，5d最低，轉染組中Survivin的明顯下降，統(tǒng)計學分析有高度統(tǒng)計意義。 結論：利用脂質體將質粒pcDNA4C-TNF-β cDNA成功轉染HepG<,2>細胞，轉染后TNF-β穩(wěn)定表達。Survivin在對照組HepG<,2>細胞中明顯表達，而TNF-β基因轉染后HepG<,2>細胞中Survivin的表達明顯下調。為進一步研究TNF-β及Survivin對HepG<,2