ALA-PDT對(duì)Hela和Caski細(xì)胞增殖凋亡機(jī)制的初步探討.pdf

1、學(xué)校代碼：10246‘；：09211250011碩士學(xué)位論文(專(zhuān)業(yè)學(xué)位）ALAPDT對(duì)Hela和Caski細(xì)胞增殖凋亡機(jī)制的初步探討院系：醫(yī)學(xué)院專(zhuān)業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)姓名：林倩如指導(dǎo)_t師：隋龍主任醫(yī)師完成日期：2012年3月10日中文摘要宮頸癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，全世界每年有25萬(wàn)婦女死于宮頸癌，約50萬(wàn)宮頸癌新發(fā)病例，目前已明確HPV感染特別是高危型HPV持續(xù)感染與宮頸癌發(fā)病的密切關(guān)系。在所有HPV感染婦女人群中，最終約有10%發(fā)展為

2、HPV持續(xù)感染狀態(tài)。臨床上仍缺乏有效的清除HPV感染的手段，目前沒(méi)有針對(duì)HPV的治療藥物，臨床上常用的干擾素、HPV預(yù)防性疫苗療效亦有限，針對(duì)大量HPV持續(xù)感染狀態(tài)人群，亟待有效的防范或干預(yù)措施。光動(dòng)力療法（photodynamictherapyPDT)具有創(chuàng)傷小、選擇性強(qiáng)、重復(fù)性好、毒性小等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤的治療，但在婦產(chǎn)科疾病特別是宮頸疾病方面仍處于起步階段。本實(shí)驗(yàn)選用的光敏劑5氨基酮戊酸（5aminolevuli

3、nic，ALA)是第二代光敏劑，能選擇性地積聚在病毒感染增殖活躍的細(xì)胞中，克服第一代光敏劑在體內(nèi)滯留時(shí)間長(zhǎng)、所需避光時(shí)間長(zhǎng)、組織選擇性差等缺陷。本實(shí)驗(yàn)以宮頸鱗癌細(xì)胞Caski細(xì)胞和宮頸腺癌細(xì)胞Hela細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)SRB法、流式細(xì)胞儀、熒光實(shí)時(shí)定量PCR、蛋白免疫印跡法，探討新型光敏劑5氨基酮戊酸介導(dǎo)的光動(dòng)力治療(ALATOT)清除HPV感染的機(jī)制和誘導(dǎo)其凋亡的分子機(jī)理，為ALAPDT最終走向臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。目的1.觀

4、察ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞Hela、Caski細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，并篩選出ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響的最佳作用參數(shù)（光敏劑濃度激光劑量）。2.觀察ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞Hela、Caski細(xì)胞HPV1816E6、E7基因mRNA的影響，明確其清除HPV感染的能力。3.測(cè)定ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞Hela、Caski細(xì)胞調(diào)亡相關(guān)基因表達(dá)的影卩M，探尋ALAPDT誘導(dǎo)凋亡的通路。方法1.SRB法檢測(cè)ALAPDT作用于宮頸癌細(xì)胞Hela、

5、Caski細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)的變化，并比較兩種細(xì)胞對(duì)ALAPDT的敏感性差異。2.AnnexinVPI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞Hela、Caski細(xì)胞凋亡的影響。3.RealtimePCR檢測(cè)ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞HelaCaski細(xì)胞內(nèi)Caspase3、P53、HPV1816E6E7mRNA表達(dá)水平的影響。4.WesternBlot檢測(cè)ALAPDT對(duì)宮頸癌細(xì)胞Hela、Caski細(xì)胞內(nèi)P53、cleavedCaspas