Irisin對(duì)胰島β細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　胰島β細(xì)胞數(shù)量的減少和功能障礙在2型糖尿病發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用。高糖毒性可導(dǎo)致胰島β細(xì)胞的凋亡增加和功能障礙。Irisin是新近發(fā)現(xiàn)的一種肌肉因子，可使白色脂肪組織棕色化，增加脂肪組織生熱作用以及能量消耗，具有減重、改善胰島素抵抗及降低血糖的功能。最近的研究發(fā)現(xiàn)irisin具有促進(jìn)細(xì)胞增殖以及保護(hù)細(xì)胞的功能。然而關(guān)于irisin對(duì)胰島β細(xì)胞的作用尚不清楚。因此本研究探討irisin對(duì)體外培養(yǎng)的 INS-1胰島β細(xì)胞增

2、殖的影響和高糖環(huán)境下β細(xì)胞凋亡的影響及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)胰島β細(xì)胞INS-1細(xì)胞株，用不同濃度（0、40、60、80、100、150 ng/ml）的irisin干預(yù)INS-1細(xì)胞12 h；用100 ng/ml irisin干預(yù)INS-1細(xì)胞不同時(shí)間（0、6、12、18、24、48 h），采用CCK-8檢測細(xì)胞增殖情況。100 ng/ml irisin干預(yù)INS-1細(xì)胞24 h，或者先用10μmol/l E

3、RK抑制劑U0126或P38 MAPK抑制劑SB203580孵育INS-1細(xì)胞30 min再接著用100 ng/ml irisin干預(yù)細(xì)胞24 h后，通過western blot檢測ERK和P38蛋白磷酸化水平，CCK-8檢測細(xì)胞增殖情況。用25 mmol/l的葡萄糖培養(yǎng)INS-1細(xì)胞24 h，接著用100 ng/ml irisin干預(yù)24 h后，通過Annexin V-FITC/PI染色，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況；采用 ELISA檢

4、測INS-1細(xì)胞對(duì)葡萄糖刺激的胰島素分泌情況；采用western blot方法檢測INS-1細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bad、Bax的水平及抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的水平。
　　結(jié)果：
　　Irisin干預(yù)后的INS-1細(xì)胞活力顯著增加，且100 ng/ml irisin干預(yù)24 h時(shí)作用最明顯（P<0.05）。與對(duì)照組相比，irisin干預(yù)后的INS-1細(xì)胞內(nèi)ERK和P38蛋白磷酸化

5、水平明顯增加，ERK抑制劑U0126或P38 MAPK抑制劑SB203580可以降低irisin對(duì) ERK和P38蛋白磷酸化的水平，并且可以抑制 irisin對(duì) INS-1細(xì)胞的增殖作用（P<0.05）。Irisin干預(yù)高糖處理后的INS-1細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率顯著下降（P<0.05），并且葡萄糖刺激的胰島素分泌能力增強(qiáng)（P<0.05）。與單用高糖干預(yù)相比，irisin干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)Bcl-2和Bcl-xl抗凋亡蛋白水平升高，Caspase