p38MAPK在犬體外循環(huán)缺血再灌注心肌胰島素抵抗發(fā)生機制中的作用.pdf

1、目的:檢測p38MAPK在犬體外循環(huán)(CPB)缺血再灌注心肌胰島素抵抗（IR）中的表達，分析心肌細胞中p38MAPK對葡萄糖轉運蛋白-4(GLUT4)的影響，進一步探討缺血再灌注心肌胰島素抵抗中介導GLUT4表達的信號傳導通路。
　　 方法:健康雜種犬24條隨機分成四組。組Ⅰ(n=6)不阻斷主動脈;組Ⅱ(n=6)主動脈阻斷60min;組Ⅲ(n=6)主動脈阻斷60min+茴香霉素(p38MAPK激動劑);組Ⅳ(n=6)主動脈阻斷6

2、0min+SB203580(p38MAPK阻斷劑)。分別在體外循環(huán)轉流前(T1)、開放主動脈后15min(T2)、60min(T3)、90min(T4)四個時間點，取動脈血、冠狀靜脈竇血和左室心尖部心肌組織。運用放射免疫法測定血漿胰島素、胰高血糖素濃度;氧化酶法測定血漿葡萄糖濃度，并根據所測數據進一步計算分析心肌的葡萄糖凈攝取量和葡萄糖凈攝取率;分析比較各時間點的與胰島素抵抗（IR）相關的指標的變化;同時監(jiān)測圍手術期血流動力學的變化;免

3、疫組化測定p38MAPK、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表達，并以圖象分析系統(tǒng)檢測分析蛋白表達的變化情況;Real TimeRT-PCR法檢測心肌P38MAPK和GLUT4的mRNA量的表達及變化。
　　 結果:1.葡萄糖代謝:在心肌缺血再灌注后，組Ⅱ、組Ⅲ和組Ⅳ的血漿葡萄糖濃度，與組Ⅰ和轉流前比較均存在不同程度增高(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅱ比較，組Ⅲ血漿葡萄糖濃度增高低，持續(xù)時間短、恢復快(P＜0.01），組Ⅳ

4、血漿葡萄糖濃度增高程度更高，持續(xù)時間長、恢復慢(P＜0.05或P＜0.01);組Ⅳ與組Ⅲ比較，血漿葡萄糖濃度增高更明顯，持續(xù)時間更長、恢復更慢(P＜0.01）。組Ⅱ、組Ⅲ和組Ⅳ三組的心肌葡萄糖凈攝取量及凈取率較組Ⅰ以及體外循環(huán)轉流前均存在不同程度明顯降低(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅱ比較，組Ⅲ心肌葡萄糖凈攝取量及凈取率降低程度低，持續(xù)時間短、恢復快(P＜0.05或P＜0.01)，組Ⅳ心肌葡萄糖凈攝取量及凈取率降低更明顯，持續(xù)時間

5、長、恢復慢(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅲ比較，組Ⅳ心肌葡萄糖凈攝取量及凈取率降低更明顯，持續(xù)時間更長、恢復更慢(P＜0.01）。2.血漿胰島素和胰高血糖素:在心肌缺血再灌注后，組Ⅱ、組Ⅲ和組Ⅳ的外周血漿胰島素和胰高血糖素濃度，與組Ⅰ和轉流前比較均存在不同程度增高(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅱ比較，組Ⅲ血漿胰島素和胰高血糖素濃度增高程度低，持續(xù)時間短、恢復快(P＜0.01），組Ⅳ胰島素和胰高血糖素濃度增高更明顯，持續(xù)時間長

6、、恢復慢(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅲ比較，組Ⅳ血漿胰島素和胰高血糖素濃度增高更明顯，持續(xù)時間長、恢復慢(P＜0.01)。3.胰島素抵抗指數:在心肌缺血再灌注后，組Ⅱ、組Ⅲ和組Ⅳ三組的胰島素抵抗指數較組Ⅰ以及轉流前均存在不同程度明顯升高(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅱ比較，組Ⅲ胰島素抵抗指數升高不明顯，持續(xù)時間短、恢復快(P＜0.05或P＜0.01)，組Ⅳ胰島素抵抗指數升高更明顯，持續(xù)時間長、恢復慢(P＜0.05或P＜0.

7、01);與組Ⅲ比較，組Ⅳ胰島素抵抗指數升高更明顯，持續(xù)時間更長、恢復更慢(P＜0.01)。4.心功能指標:在心肌缺血再灌注后，組Ⅱ、組Ⅲ和組Ⅳ三組的LVSP和±dp/dtmax較組Ⅰ以及轉流前均存在不同程度明顯降低，LVEDP均存在不同程度明顯升高(P＜0.05或P＜0.01);與組Ⅱ比較，組Ⅲ的LVSP及±dp/dtmax下降不明顯，LVEDP升高不顯著，持續(xù)時間短，恢復快(P＜0.05或P＜0.01)，組Ⅳ的LVSP及±dp/dtm

8、ax下降更明顯，LVEDP升高更顯著，持續(xù)時間更長、恢復更慢(P＜0.05或P＜0.01)。與組Ⅲ比較，組Ⅳ的LVSP及±dp/dtmax下降更明顯，LVEDP升高更顯著，持續(xù)時間更長、恢復更慢(P＜0.01）。5.心肌P38MAPK和GLUT4的蛋白及總mRNA表達量:心肌缺血再灌注后，較組Ⅰ以及體外循環(huán)轉流前，組Ⅱ、組Ⅳ的心肌P38MAPK蛋白及總mRNA表達均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01);組Ⅲ心肌p38MAPK蛋白及總m

9、RNA表達上升(P＜0.05或P＜0.01)。與組Ⅱ相比較，組Ⅲ心肌細胞p38MAPK蛋白及總mRNA的表達量高于該組(P＜0.01）;組Ⅳ心肌細胞p38MAPK蛋白及總mRNA的表達量下降明顯(P＜0.05或P＜0.01)。與組Ⅲ比較，組Ⅳ心肌細胞p38MAPK蛋白及總mRNA的表達量下降更明顯(P＜0.01）。在心肌缺血再灌注后，較組Ⅰ和轉流前相比，組Ⅱ和組Ⅳ的心肌細胞GLUT4蛋白及總mRNA表達量均存在不同程度降低(P＜0.05

10、或P＜0.01);組Ⅲ心肌細胞GLUT4蛋白及總mRNA表達量表現(xiàn)出明顯的上升(P＜0.01);與組Ⅱ相比較，體外循環(huán)心肌缺血再灌注后組Ⅲ心肌細胞GLUT4蛋白及總mRNA的表達量高于該組(P＜0.01);組Ⅳ心肌細胞GLUT4蛋白及總mRNA的表達量下降明顯(P＜0.05或P＜0.01)。與組Ⅲ比較，組Ⅳ心肌細胞GLUT4蛋白及總mRNA的表達量下降更嚴重(P＜0.01）。
　　 結論:在缺血再灌注心肌胰島素抵抗過程中，p38