TGF—β合并同種異體肌腱重建兔前交叉韌帶的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的 前交叉韌帶(ACL)損傷是常見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)損傷。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，熱衷運(yùn)動(dòng)人群的增多，該病的發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)。由于ACL損傷后可引起膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定，有導(dǎo)致骨性關(guān)節(jié)炎的可能。同時(shí)它缺乏自我愈合的能力，所以這種疾病的治療方法以手術(shù)重建為主。目前手術(shù)重建所采用的韌帶移植物可大致分為自體肌腱，異體肌腱和人工肌腱或組織工程肌腱三種。由于自體肌腱的有限性和引起取腱部位的并發(fā)癥，如膝前區(qū)疼痛、膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)定、下跪困難等的可能性，不適

2、用于重建韌帶的翻修或者高水平的運(yùn)動(dòng)員。人工肌腱可以短期內(nèi)恢復(fù)病人的運(yùn)動(dòng)水平，但是價(jià)格昂貴，適應(yīng)癥狹窄，有引起慢性滑膜炎的危險(xiǎn)，而且遠(yuǎn)期療效尚不明確。組織工程肌腱技術(shù)尚不成熟，尚停留在試驗(yàn)階段。隨著人們意識(shí)的提高，消毒方法的改進(jìn)，提供較多的無(wú)免疫排斥反應(yīng)、無(wú)感染危險(xiǎn)的同種移植物成為可能。同種異體肌腱成為重建ACL的比較理想的選擇。肌腱移植后的愈合過(guò)程，關(guān)系到術(shù)后病人康復(fù)計(jì)劃，遠(yuǎn)期的療效，甚至重建的成敗。近年來(lái)，生物學(xué)、生物力學(xué)、生物化學(xué)和

3、細(xì)胞生物學(xué)研究飛速進(jìn)展，各種現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)生物技術(shù)與方法滲透到肌腱愈合過(guò)程的研究中。對(duì)于自體肌腱重建后的愈合過(guò)程，國(guó)內(nèi)外學(xué)者作了大量的研究。但是對(duì)于同種異體肌腱的愈合過(guò)程國(guó)內(nèi)外報(bào)道不多。本論文旨在研究深低溫冷凍同種異體肌腱移植重建ACL關(guān)節(jié)外懸吊固定術(shù)后肌腱在骨隧道中的愈合過(guò)程，以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)對(duì)愈合過(guò)程的影響，為手術(shù)治療和術(shù)后康復(fù)提供依據(jù)。同時(shí)為促進(jìn)愈合過(guò)程提供新的思路。 材料與方法新西蘭大白兔36只，體重2.2～2

4、.6kg，平均20月齡。隨機(jī)分為三組，每組12只動(dòng)物24個(gè)后膝關(guān)節(jié)。第一組為自體肌腱移植對(duì)照組(C)，行自體伸趾長(zhǎng)肌腱重建前交叉韌帶。第二、三組均取伸趾長(zhǎng)肌腱，然后分組別按照二步深低溫冷凍法保存二周，然后重建ACL。第三組肌腱復(fù)溫后作為移植物重建第二組動(dòng)物ACL，作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(T)。第二組肌腱復(fù)溫后與生長(zhǎng)因子TGF-β復(fù)合后重建第三組動(dòng)物ACL，作為實(shí)驗(yàn)組(E)。分別于手術(shù)后第4、6、8周空氣栓塞法處死動(dòng)物取材，每組4只共8個(gè)膝關(guān)節(jié)。

5、先行大體觀察。然后每組分別各取3個(gè)膝關(guān)節(jié)去除膝周軟組織后10％中性甲醛固定，EDTA脫鈣，然后做HE染色，Masson染色以觀察骨隧道與肌腱移植物界面之間愈合情況。其余5個(gè)膝關(guān)節(jié)做生物力學(xué)測(cè)試，測(cè)量韌帶的最大拔出力。 結(jié)果 1．術(shù)后各時(shí)間段動(dòng)物膝關(guān)節(jié)內(nèi)大體觀察無(wú)明顯積液，半月板無(wú)明顯磨損及退變。關(guān)節(jié)軟骨無(wú)明顯軟化及磨損。移植肌腱關(guān)節(jié)內(nèi)部分無(wú)明顯松馳，各組移植肌腱關(guān)節(jié)內(nèi)部分無(wú)明顯壞死，肌腱為白色，異體移植肌腱顏色較暗?？梢?jiàn)

6、滑膜包裹。骨隧道內(nèi)移植肌腱未見(jiàn)明顯組織壞死。各組關(guān)節(jié)線處愈合較差。隧道內(nèi)口處光滑。 2．隨取材組織時(shí)間延長(zhǎng)，HE、Masson切片鏡下觀察顯示骨隧道一肌腱間隙中膠原組織呈增多趨勢(shì)。自體肌腱于六周時(shí)大致愈合。八周時(shí)形成間斷骨小梁樣組織。異體肌腱于八周左右愈合。添加因子的異體肌腱愈合過(guò)程優(yōu)于單純異體肌腱的重建。但是比自體肌腱移植稍差。八周時(shí)也可看見(jiàn)骨小梁樣組織。 3．二步深低溫冷凍處理的同種異體肌腱移植后可以看到肌腱組織的松

7、散。有裂解、壞死，再血管化過(guò)程。推測(cè)可能與愈合過(guò)程較差有關(guān)。 4．生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果使用SPSS 10.0軟件分析。各組別間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。添加細(xì)胞因子TGF-β后的同種異體肌腱力學(xué)特性優(yōu)于單純同種異體肌腱重建組，但是弱于自體肌腱重建。 結(jié)論 1．二步深低溫冷凍法是安全可靠的處理和保存同種異體肌腱的方法，但經(jīng)該方法處理后的同種異體肌腱移植有結(jié)構(gòu)松散的現(xiàn)象，推測(cè)可能與術(shù)后生物力學(xué)數(shù)據(jù)表現(xiàn)差有關(guān)。