轉(zhuǎn)染T-bet肝癌細胞瘤苗的制備及其體外抗腫瘤免疫效應研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學碩士學位論文轉(zhuǎn)染Tbet肝癌細胞瘤苗的制備及其體外抗腫瘤免疫效應研究姓名：郝穎申請學位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)指導教師：徐勤20070501三、結(jié)果1RToPCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳結(jié)果顯示在預期位置有相對分子質(zhì)量為1608bp的特異性擴增帶。測序結(jié)果證實，Tbet的編碼序列和Genbank中TbetmRNA序列相同。雙酶切和PCR結(jié)果證實插入片段序列正確。2轉(zhuǎn)染了pEGFPC1Tbet載體的靶細胞HepG2中，熒光顯微

2、鏡下可見其表達綠色熒光蛋白，G418(640mg／L)作用14d后，篩選出了穩(wěn)定表達Tbet基因的陽性克隆細胞HepG2Tbet，RTPCR方法檢測到目的基因Tbet的一個202bp大小的eDNA擴增產(chǎn)物。WesternBlot的結(jié)果也證實了Tbet蛋白的表達，約53kd。MTT法證實MMC滅活后HepG2Tbet已無增殖活性，并在MMC處理前后6h、24h和48hRTPCR檢測到TCVTbet中Tbet基因的穩(wěn)定表達。3(1)淋巴細胞

3、TCVTbet共培養(yǎng)上清中IFN1r的含量，24h、48h、72h均顯著高于淋巴細胞培養(yǎng)液組和淋巴細胞TCVHepG2組的IFN的含量◇005)(2)淋巴細胞TCVTbet組Thl細胞因子IFN的分泌顯著高于淋巴細胞TCVHepG2組或淋巴細胞培養(yǎng)液組，差異有統(tǒng)計學意義p005)；同時該組Th2細胞因子Ⅱ廣4的分泌顯著低于其他兩組，差異有統(tǒng)計學意義p005)。(3)經(jīng)TCVIIe#2及TCVTbet體外誘導后效應細胞對人肝癌細胞Hep0

4、2的殺傷率分別為(14Ix017)％及(307蝴3)％，而空白對照組殺傷率為(74型05)％，方差分析表明，三組之同差異有顯著意義加005)四、結(jié)論成功擴增出人Tbet基因，構(gòu)建人Tbet的真核表達載體pEGFPClTbet，建立穩(wěn)定表達Tbet的人肝癌細胞株HepG2Tbet，制備表達Tbet基因的人肝癌細胞瘤苗TCVTbet，此瘤苗在體外能夠誘導有效的抗腫瘤免疫反應為研究Tbet基因?qū)γ庖呒毎恼{(diào)節(jié)和腫瘤基因治療奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：