FasL基因重組2型腺相關病毒轉導大鼠骨髓來源DC和活性腎臟的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩86頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:利用2型重組腺相關病毒載體介導FasL基因轉導大鼠骨髓來源DC和活體腎臟,觀察轉導后FasL基因的表達,為進一步研究FasL轉基因在同種異體器官移植中的作用奠定基礎。 方法:1.構建穿梭質粒pSNAV2.0-FasL-IRES-EGFP,通過脂質體轉染BHK-21細胞,經(jīng)G418篩選,獲得載體細胞株BHK/FasL-IRES-EGFP;2.利用重組1型單純皰疹病毒(HSV1-rc/△UL2)感染載體細胞,獲得重組腺相關病毒

2、;3.通過氯仿抽提、冰乙醇沉淀法純化、濃縮重組腺相關病毒,SDS-PAGE檢測其純度,地高辛標記探針點雜交測定其滴度;4.重組腺相關病毒載體介導FasL基因轉導原代培養(yǎng)的大鼠骨髓來源DC,RT-PCR、流式細胞儀、熒光顯微鏡檢測其表達;5.用生理鹽水或重組腺相關病毒經(jīng)腎動脈灌注大鼠左腎,并使之于左。腎內滯留45分鐘,3周、5周、7周后處死大鼠取腎臟標本,通過RT-PCR、HE染色和ICH,檢測FasL表達以及評價腎臟的組織形態(tài)變化。

3、 結果: 1.成功構建了穿梭質粒pSNAV2.0-FasL-IRES-EGFP; 2.獲得了重組腺相關病毒,經(jīng)純化、濃縮后,SDS-PAGE檢測其純度達98%以上,地高辛標記點雜交測定其滴度為1×10<'12>vg/ml; 3.rAAV2-FasL-IRES-EGFP轉導大鼠骨髓來源的DC,48小時后才可以觀察到綠色熒光蛋白的表達,隨著時間的延長逐漸增多,至第7天左右,到達高峰,以后維持這一水平;通過流式細胞

4、儀檢測最高峰時DC表面GFP的表達效率為18%左右;同時通過RT-PCR也證實了FasL基因的表達; 4.rAAV2-FasL-IRES-EGFP轉導活體腎臟后,HE染色證實其未引起腎臟組織的異常形態(tài)學改變;RT-PCR和ICH證實了FasL 基因表達但局限于腎小管上皮細胞。 結論 1.成功制備了FasL基因重組2型腺相關病毒; 2.rAAV介導的FasL基因成功轉導大鼠骨髓來源的DC,效率較低,但基因的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論