縫隙連接在左旋多巴誘發(fā)異動(dòng)癥發(fā)生機(jī)制中的作用.pdf

1、背景：左旋多巴誘發(fā)異動(dòng)癥(levodopa-induced dyskinesia,LID)是帕金森病藥物治療常見運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥,慢性不規(guī)則多巴胺刺激是LID形成的重要誘因,其發(fā)生與基底節(jié)神經(jīng)元異常同步化和振蕩活動(dòng)關(guān)系密切。縫隙連接(gap junction,GJ)是由連接相鄰2個(gè)細(xì)胞之間的連接通道排列而成的一種特殊膜結(jié)構(gòu),參與細(xì)胞間信息、能量和物質(zhì)的交換、代謝偶聯(lián)和電信號(hào)偶聯(lián)。GJ是神經(jīng)元同步化活動(dòng)重要機(jī)制,其功能受到多巴胺能刺激的調(diào)節(jié)。這

2、些線索提示縫隙連接功能異?？赡軈⑴c左旋多巴誘發(fā)異動(dòng)癥發(fā)生機(jī)制。我們前期的實(shí)驗(yàn)通過免疫組化證實(shí)了LID組紋狀體和運(yùn)動(dòng)皮層Cx36表達(dá)較PD組和正常對(duì)照組顯著增多,支持了該設(shè)想。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步探討縫隙連接在左旋多巴誘發(fā)異動(dòng)癥發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　目的：通過了解不同濃度的縫隙連接阻斷劑甘珀酸(carbenoxolon,CBX)及奎寧(quinine,QN)對(duì)左旋多巴誘發(fā)異動(dòng)癥大鼠異動(dòng)行為的影響,觀察異動(dòng)癥大鼠縫隙連接蛋白Cx36在不同

3、類型紋狀體神經(jīng)元的表達(dá)差異和基底節(jié)運(yùn)動(dòng)皮層蛋白水平的變化,探討縫隙連接功能異常在異動(dòng)癥發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　方法：6-羥多巴胺偏側(cè)帕金森病大鼠模型重復(fù)腹腔注射左旋多巴(20mg/kg)和卞絲肼(10mg/kg)共21天,以建立左旋多巴誘發(fā)異動(dòng)癥模型。將大鼠分為三組:LID組、PD組、正常對(duì)照組。①通過LID大鼠腹腔注射不同劑量的CBX與側(cè)腦室注射奎寧來觀察縫隙連接阻斷劑對(duì)異動(dòng)癥大鼠行為學(xué)的影響。②免疫雙標(biāo)法分析各組腦啡肽(ENK

4、)陽性紋狀體傳出神經(jīng)元及小清蛋白(parvalbumin)陽性中間神經(jīng)元CX36表達(dá)情況。③Western-blot檢測(cè)各組紋狀體及運(yùn)動(dòng)皮層Cx36蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①行為學(xué)研究顯示大劑量(>60mg/kg)的甘珀酸腹腔注射和奎寧側(cè)腦室注射(>2.5μmol)能減少異動(dòng)癥大鼠的AIM評(píng)分(P<0.05)。②免疫雙標(biāo)顯示異動(dòng)癥大鼠損毀側(cè)紋狀體腦啡肽陽性神經(jīng)元Cx36表達(dá)(57.59％±5.36%)較正常對(duì)照組(32.67%±4.

5、22%)和PD組(37.24%±0.86%)增強(qiáng)(F=78.060,P<0.01),小清蛋白陽性中間神經(jīng)元Cx36表達(dá)(68.49%±11.60%)也較正常對(duì)照組(40.43%±2.30%)和PD組(31.92%±5.68%)增強(qiáng)(F=39.567,P<0.01)。③白質(zhì)印跡檢測(cè)顯示異動(dòng)癥大鼠損毀側(cè)紋狀體和運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)Cx36表達(dá)水平分別為(219.56%±18.12%)、(226.03%±16.33%),高于正常對(duì)照組的(104.05%±

6、3.82%)(t=15.389,P<0.01)、(105.27%±2.82%)(t=8.074,P<0.01)和PD組的(119.31%±8.92%)(t=13.356,P<0.01)、(138.20%±17.88%)(t=5.872,P<0.01)。
　　結(jié)論：左旋多巴誘發(fā)的異動(dòng)癥大鼠損傷側(cè)紋狀體及運(yùn)動(dòng)皮層的Cx36蛋白表達(dá)水平增強(qiáng),紋狀體ENK陽性傳出神經(jīng)元Cx36表達(dá)水平上調(diào),且Parvalbumin陽性中間神經(jīng)元Cx36表