左旋多巴誘發(fā)異動癥大鼠模型直接通路活化機制的研究.pdf

1、第一部分： 左旋多巴誘發(fā)異動癥大鼠紋狀體DARPP-32蛋白磷酸化狀態(tài)的變化 目的：研究LID大鼠紋狀體內(nèi)DARPP-32蛋白磷酸化狀態(tài)的變化，探討LID時多巴胺D1受體介導的直接通路過度活化的機制。 方法：SD大鼠應用6-OHDA立體定位注射制備偏側(cè)帕金森病大鼠模型，然后應用L-dopa治療(10mg/kg，每天2次)28d誘發(fā)LID大鼠模型。所有大鼠共分為對照組(接受同時程、同等劑量的L-dopa治療，n=8

2、)，L-dopa治療組(n=8)、LID組(n=8)。觀察各組大鼠行為學變化，并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(reversetranscriptionpolymerasechainreactionRT-PCR)及免疫印跡技術(shù)檢測檢測其紋狀體內(nèi)總DARPP-32的mRNA與蛋白表達及其Thr34位點磷酸化水平。 結(jié)果：LID大鼠模型復制成功后出現(xiàn)了與人類LID相似的對側(cè)上肢、軀干和口面部異常不自主運動(abnormalinvolunt

3、arymovement，AIM)，并隨L-dopa治療時間的延長而加重。LID大鼠毀損側(cè)Thr-34位點磷酸化的DARPP-32水平(1075.2±103.3)較對照組(198.7±49.5)及L-dopa治療組(213.91±58.9)明顯增高，差異均有顯著性意義(P＜0.01)。后兩組中Thr-34位點磷酸化的DARPP-32水平無明顯差異(P＞0.05)?？侱ARPP-32mRNA相對表達強度在對照組(1.10±0.26)、L-d

4、opa治療組(1.20±0.46)與LID組(1.02±0.24)之間無顯著差異?？侱ARPP-32蛋白的表達在對照組(1308.8±120.1)、L-dopa治療組(1401.5±132.3)與LID組(1387.1±120.2)之間亦無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：DARPP-32的Thr-34位點的磷酸化水平的改變是LID時多巴胺D1受體介導的直接通路異常活化的關(guān)鍵因素之一。 第二部分 反義FosB和

5、反義CREB抑制左旋多巴誘發(fā)異動癥大鼠前強啡肽原基因的表達 目的：探討紋狀體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子FosB基因和CREB基因?qū)ID大鼠PDynmRNA表達的影響。 方法：6-OHDA立體定位注射及慢性L-dopa治療誘發(fā)LID大鼠模型，所有大鼠共分為對照組(n=10)、對照+反義FosB組(n=12)、對照+正義FosB組(n=13)、對照+反義CREB組(n=11)、對照+正義CREB組(n=13)、LID組(n=10)、L

6、ID+反義FosB組(n=9)、LID+正義FosB組(n=7)、LID+反義CREB組(n=8)、LID+正義CREB組(n=8)。對照組與LID組分別注射PBS，其余各組大鼠紋狀體內(nèi)分別注射相應反義、正義FosB和CREB。后5組大鼠進行AIM評分，并采用原位雜交方法觀察大鼠紋狀體內(nèi)PDynmRNA的變化。 結(jié)果：反義FosB治療前后LID大鼠AIM評分分別為40.1±9.2、12.5±5.4，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01

7、)。LID+反義FosB組損毀側(cè)紋狀體PDynmRNA水平(0.2415±0.0220)較LID+正義FosB組損毀側(cè)(0.4105±0.0386)顯著降低(P＜0.01)。對照+反義CREB組大鼠損毀側(cè)紋狀體PDynmRNA水平(0.1775±0.0246)較對照+正義CREB組(0.2454±0.0243)明顯降低(P＜0.01)。反義CREB治療前后LID大鼠AIM評分分別為40.5±10.0、43.2±11.8，無明顯差異(P＞

8、0.05)。LID+反義CREB組損毀側(cè)紋狀體PDynmRNA水平(0.2415±0.0220)與LID+正義CREB組(0.4087±0.0440)之間差異無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：在LID大鼠中，F(xiàn)osB蛋白取代了CREB調(diào)控PDynmRNA的表達，是發(fā)生LID的關(guān)鍵因素之一。 第三部分 MK-801對左旋多巴誘發(fā)異動癥大鼠強啡肽原基因與DARPP-32蛋白表達的影響 目的：研究MK-80

9、1對LID大鼠紋狀體內(nèi)PDynmRNA表達及DARPP-32蛋白磷酸化狀態(tài)的影響。 方法：PD大鼠應用L-dopa治療(10mg/kg，每天2次)28d誘發(fā)LID大鼠模型，于第29dL-dopa治療前15min腹腔注射MK-801(0.1mg/kg)一次(n=8)。接受同時程、同等劑量的L-dopa治療正常大鼠作為對照組(n=8)。采用原位雜交技術(shù)檢測PDynmRNA水平及免疫印跡技術(shù)檢測LID大鼠紋狀體內(nèi)DARPP-32的Th

10、r-34位點磷酸化水平的變化。 結(jié)果：MK-801組大鼠刻板動作明顯減少，AIM評分(5.9±3.1)較與LID組(40.8±10.5)比較有極顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。MK-801治療組大鼠PDynmRNA相對表達強度(0.2313±0.0568)較LID組(0.3662±0.0625)顯著降低(P＜0.05)，與對照組(0.2085±0.0573)相比無明顯差異(P＞0.05)。MK-801治療組大鼠Thr-34位點磷