非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA受體拮抗劑引發(fā)小鼠行為學(xué)變化及前腦內(nèi)即早基因的表達(dá).pdf

1、目的: 應(yīng)用親和力不同的NMDA非競(jìng)爭(zhēng)性受體拮抗劑MK-801(地卓西平馬來酸鹽)和Amantadine(金剛脘胺)作用于小鼠，采用量化的行為學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，比較兩種藥物引起的行為學(xué)表現(xiàn)差異；運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腦內(nèi)兩種及早基因蛋白c-Fos和FosB/△FosB蛋白的表達(dá)情況和兩種藥物之間的表達(dá)差異；用免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)法對(duì)陽性表達(dá)神經(jīng)元進(jìn)行定性分析，試圖根據(jù)兩種藥物所引發(fā)腦功能活動(dòng)的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)來探討精神分裂癥各假說之間的內(nèi)在聯(lián)系。

2、 方法: 雄性昆明小鼠156只，隨機(jī)分為4組：①生理鹽水組(36只)；②MK-801組(40只)；③Amantadine(5mg/kg)組(40只)；④Amantadine(15mg/kg)組(40只)。各組實(shí)驗(yàn)小鼠給藥前半數(shù)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，半數(shù)一次性被動(dòng)回避反應(yīng)學(xué)習(xí)能力訓(xùn)練；給藥第一天移動(dòng)行為、刻板行為檢測(cè)；給藥第二天分別進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和一次性被動(dòng)回避反應(yīng)記憶能力檢測(cè)；給藥第三天2h后常規(guī)灌注固定、取腦，做連續(xù)冠狀冰凍切片，片厚

3、40um。將切片分別行FosB/△FosB和c-Fos免疫組織化學(xué)染色、連續(xù)貼片。顯微攝像，計(jì)算機(jī)圖像處理，繪制陽性細(xì)胞在前腦的分布模式圖，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞在各核團(tuán)的分布密度。結(jié)果采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的比較采用t檢驗(yàn)。以P<0.05表示在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異，P<0.01表示在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有極顯著差異。 結(jié)果: 1.MK-801與Amantadine引發(fā)小鼠

4、行為學(xué)表現(xiàn)強(qiáng)度不同：MK-801可引起小鼠同時(shí)出現(xiàn)較典型的類似精神分裂癥的陽性癥狀、陰性癥狀及認(rèn)知功能缺陷表現(xiàn)，而Amantadine所引發(fā)的小鼠行為學(xué)表現(xiàn)卻與對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.MK-801與Amantadine引發(fā)小鼠腦c-Fos表達(dá)的異同：MK-801引起實(shí)驗(yàn)小鼠前腦內(nèi)前額皮質(zhì)、梨狀皮質(zhì)、扣帶皮質(zhì)c-Fos的表達(dá)較多，c-Fos表達(dá)最集中的部位為丘腦各核團(tuán)，包括丘腦中線核群、板內(nèi)核群、網(wǎng)狀核等。屬于前腦的隔區(qū)、杏

5、仁核群c-Fos的表達(dá)也較多，而嗅結(jié)節(jié)、伏隔核、尾殼核幾乎沒有表達(dá)。5mg/kg，15mg/kg劑量的Amantadine引起c-Fos表達(dá)呈劑量相關(guān)性，與生理鹽水對(duì)照組相比，增加明顯。在丘腦核團(tuán)，Amantadine引起的c-Fos的表達(dá)較少，與MK-801組相比，差別較大。 3.MK-801與Amantadine引發(fā)小鼠腦FosB/△FosB表達(dá)的異同：MK-801引起實(shí)驗(yàn)小鼠的前腦內(nèi)FosB/△FosB蛋白較多表達(dá)，主要集

6、中在伏隔核、嗅結(jié)節(jié)、隔區(qū)、梨狀皮質(zhì)、終紋床核等核團(tuán)。5mg/kg,15mg/kg劑量的Amantadine呈劑量相關(guān)性的引起FosB/△FosB蛋白的表達(dá)，核團(tuán)分布與MK-801一致，但在數(shù)量上與MK-801組存在差異。非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA受體拮抗劑引起實(shí)驗(yàn)小鼠FosB/△FosB蛋白的表達(dá)在D3R分布集中的核團(tuán)最多，這為我們了解精神分裂癥中谷氨酸和多巴胺異常尤其是D3R表達(dá)增多之間的關(guān)系提供了依據(jù)。 4.MK-801與Amanta