鹽酸戊乙奎醚對大鼠海馬腦片缺氧缺糖-復(fù)氧復(fù)糖損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的: 研究鹽酸戊乙奎醚（Penehyclidine hydrochloride，PHC）對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷（Hypoxia/Hypoglycemia and Reperfusion Injury，H/R）的保護(hù)作用及作用機(jī)制，旨在為拓寬該藥臨床用途提供科學(xué)的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷的保護(hù)作用
　　 采用大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷模型。設(shè)

2、正常（Control）組、缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷（H/R）組、PHC 2μmol·L-1（PHC 2）組、PHC10 μmol·L-1（PHC 10）組、PHC50 μmol·L-1（PHC 50）組。測定腦片孵育液中LDH釋放率；腦片分別進(jìn)行TTC染色計算組織損傷百分率，HE染色觀察組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　 2.PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷的保護(hù)作用機(jī)制探討
　　 采用大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷

3、模型。設(shè)正常（Control）組、缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷（H/R）組、PHC50 μmol·L-1（PHC）組、鹽酸東莨菪堿50μmol·L-1 (Sco) 組。免疫印跡法測定pERK1/2、cPLA2蛋白表達(dá)量；高效液相色譜（HPLC）法測定腦脊液中氨基酸的含量；免疫組織化學(xué)法測定海馬CA1區(qū)pERK1/2、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 1.PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)

4、糖損傷的保護(hù)作用
　　 1.1PHC對缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷的大鼠海馬腦片LDH釋放率的影響H/R組LDH釋放率為42±5.8％，高于Control組9.2±1.1％（P<0.01）。與H/R組相比，PHC2、PHC10、PHC50組LDH釋放率均降低，分別是H/R組的76.2％、61.9％（P<0.01）、47.6％（P<0.01)，且該作用呈劑量依賴性（rs=-0.866, P<0.01）。提示PHC能夠降低LDH釋放率，

5、減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖所致的大鼠海馬腦片損傷。
　　 1.2PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后TTC染色OD490的影響
　　 H/R組TTC染色OD490為0.33±0.02，較Control組1.00 ±0.07明顯下降(P<0.01)，組織損傷百分率為66±5.3％。PHC3個劑量組均能顯著提高缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖海馬腦片的TTC染色后的OD490，分別是H/R組的1.2倍( P<0.05）、1.6倍（P

6、<0.01）和2.1倍（P<0.01)。而組織損傷百分率顯著降低，為H/R組的93.9％、71.2％（P<0.01）、47.0％（P<0.01)，且該作用呈劑量依賴性（rs=-0.944, P<0.01）。提示PHC能明顯降低大鼠海馬腦片組織損傷百分率。
　　 1.3PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后組織病理形態(tài)學(xué)的影響Control組海馬CA1 區(qū)結(jié)構(gòu)正常,錐體細(xì)胞排列整齊、緊密；H/R組海馬CA1 區(qū)已失去正常結(jié)

7、構(gòu),錐體細(xì)胞部分喪失, 殘存細(xì)胞大多數(shù)不正常,可見細(xì)胞腫脹，核深染，核固縮、碎裂、溶解，胞漿嗜伊紅；PHC50組海馬CA1 區(qū)結(jié)構(gòu)較完整，正常細(xì)胞與H/R組比較均明顯增多，損傷的細(xì)胞相對較少。提示PHC能減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖所致的細(xì)胞損傷。
　　 2.PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷的保護(hù)作用機(jī)制探討
　　 2.1PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后pERK1/2表達(dá)的影響
　　 免疫印跡

8、分析表明，H/R組pERK1/2蛋白的表達(dá)顯著高于正常組（P<0.01）；PHC組、Sco組pERK1/2蛋白表達(dá)量則降低（P<0.01），并且PHC組pERK1/2蛋白表達(dá)量低于Sco組（P<0.01）。免疫組織化學(xué)結(jié)果同樣表明，在海馬腦片CA1區(qū)，PHC、Sco能降低H/R后pERK1/2蛋白表達(dá)量（P<0.01），且PHC組的pERK1/2蛋白表達(dá)量低于Sco組（P<0.01）。
　　 2.2PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖

9、/復(fù)氧復(fù)糖損傷后cPLA2表達(dá)的影響免疫印跡分析表明，H/R組cPLA2蛋白表達(dá)量較Control組明顯增多（P<0.01）; PHC組、Sco組cPLA2蛋白表達(dá)量較H/R組明顯降低（P<0.01），且PHC組低于Sco組（P<0.05）。
　　 2.3PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后孵育液中氨基酸含量的影響H/R組海馬腦片孵育液中Asp、Glu濃度分別為3.54±0.7μmol·L-1、4.60±0.4μmol

10、·L-1，高于Control組0.85±0.4μmol·L-1（P<0.01）、1.65±0.1μmol·L-1（P<0.01）；Gly、GABA的含量分別為4.24±0.5μmol·L-1、7.51±0.5μmol·L-1，高于Control組2.77±0.4μmol·L-1（P<0.01）、6.42±0.8μmol·L-1（P<0.05），而GABA/Glu為1.64±0.2，較Control組3.92±0.7降低（P<0.01）。

11、PHC、Sco組均能提高此比值，分別是H/R組的2.38（P<0.01）、1.27倍，并且PHC組與Sco組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，提示PHC能減少腦缺血后興奮性氨基酸的釋放，減輕缺血性腦損傷。
　　 2.4PHC對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響在海馬腦片CA1區(qū)，H/R組Bcl-2，Bax，Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)均顯著高于Control組(均P<0.01), 而Bcl-2/Bax

12、比值顯著低于Control組（P<0.05）；PHC組Bcl-2陽性細(xì)胞的表達(dá)和Bcl-2/Bax比值均較H/R組升高(P<0.01,P<0.01), Bax和Caspase-3 陽性細(xì)胞表達(dá)均較H/R組降低(P<0.01,P<0.01)。Sco組Bcl-2陽性細(xì)胞的表達(dá)和Bcl-2/Bax比值也較H/R組升高(P<0.05，P<0.01), Bax和Caspase-3 陽性細(xì)胞表達(dá)均較H/R組降低(P<0.01,P<0.01)。與Sc

13、o組相比，PHC對以上指標(biāo)的影響能力均大于Sco（P<0.01）。
　　 結(jié)論:
　　 在本實(shí)驗(yàn)條件下得出以下結(jié)論：
　　 1.PHC 降低大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后LDH釋放率，提高其TTC染色后OD490值、降低組織損傷百分率，改善病理性損傷，對大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷顯示出明顯的保護(hù)作用。
　　 2.PHC下調(diào)大鼠海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖損傷后pERK1/2和cPLA2蛋白表達(dá)