鹽酸戊乙奎醚對大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞缺氧-復氧后凋亡的影響.pdf

1、急性冠狀動脈閉塞再灌注治療后,血管損傷造成的微血管功能障礙，限制了徹底(或完全)的組織灌注,影響治療效果。其中微血栓形成、鈣超載等可能造成微血管功能障礙,但血管內(nèi)皮功能損傷亦是其主要原因之一。解除或減輕再灌注內(nèi)皮功能損傷成為減輕再灌注損傷研究的重點。因此，培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細胞，建立心肌微血管內(nèi)皮細胞的缺氧/復氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型，對研究缺血再灌注損傷的途徑及其保護有重要意義。
　　近年來研

2、究顯示，莨菪類抗膽堿藥物對心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷有保護作用，而鹽酸戊乙奎醚(PenehyclidineHydrochl-oride,PHC)作用為一種新型的M1受體亞型阻斷劑，是否具有同樣作用？因此，本實驗采用模擬I/R建立心肌微血管內(nèi)皮細胞的H/R模型，觀察PHC預處理及H/R后給予PHC對心肌微血管內(nèi)皮細胞是否有保護作用，了解其機制，為其在心肌再灌注損傷治療方法應用提供科學依據(jù)。

3、r>　　研究目的：
　　從細胞水平上建立H/R模型,從細胞增殖能力、凋亡率、Caspase-3及Bcl-2蛋白表達上,觀察鹽酸戊乙奎醚是否對心肌微血管內(nèi)皮細胞的H/RI有保護作用及其可能的機制。
　　研究方法：
　　1.微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)及鑒定本實驗采用酶消化法及組織塊法兩種方法進行細胞的原代培養(yǎng),1:2傳代。采用熒光標記乙酰化Dil-Ac-LDL的方法鑒定。
　　研究結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)大鼠心肌微血管

4、內(nèi)皮細胞:經(jīng)微血管內(nèi)皮細胞的原代培養(yǎng)及鑒定結(jié)果,用熒光標記乙?；疍il-Ac-LDL的方法鑒定為微血管內(nèi)皮細胞。
　　2.成功制備出微血管內(nèi)皮細胞的H/R模型將試驗細胞培養(yǎng)液改為D-Hank,s液，置于37℃、5％CO2、92％N2密閉缺氧罐中環(huán)缺氧2h，后改為完全培養(yǎng)液放入常氧培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h可制備出微血管內(nèi)皮細胞的I/R模型。
　　3.H/R組細胞死亡率和凋亡率與對照組相比明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），

5、PHC+H/R組的細胞死亡率和凋亡率下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,H/R+PHC組與對照組相比，雖然細胞的死亡率和凋亡率有所下降，但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　4.干預組Caspase-3均高于對照組（P<0.05），PHC+H/R組低于H/R組和H/R+PHC組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），H/R+PHC組略低于H/R組，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。H/R組Bcl-2明顯低于對照組（P<0.