HER3激活誘導(dǎo)胃癌對(duì)拉帕替尼耐藥的機(jī)制研究.pdf

1、目的:拉帕替尼作為治療HER2陽性進(jìn)展期胃癌患者的靶向新藥，臨床試驗(yàn)初步結(jié)果不盡如人意，旁通路激活是靶向藥物耐藥的重要機(jī)制之一。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)探討HER3旁通路的激活對(duì)經(jīng)拉帕替尼處理的HER2陽性胃癌細(xì)胞的生長和信號(hào)傳導(dǎo)通路的作用，研究阻斷HER3通路后HER2陽性胃癌細(xì)胞對(duì)拉帕替尼敏感性的影響及其分子機(jī)制。
　　方法:(1)采用蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)HER2陽性細(xì)胞NCI-N87、SNU-216、SKBR3的HER家族受體表達(dá)情況。

2、克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察生長因子NRG1激活HER3受體后，腫瘤細(xì)胞對(duì)拉帕替尼藥物敏感性變化。(2)采用CCK-8法檢測(cè)拉帕替尼和pan-HER抑制劑AZD8931對(duì)NCI-N87生長的影響;采用雙因素方差分析方法(Two-way ANOVA)來評(píng)價(jià)兩藥的聯(lián)合效應(yīng)。采用siRNA基因沉默技術(shù)敲減HER3基因，觀察HER3沉默是否增加腫瘤細(xì)胞對(duì)拉帕替尼的敏感性。(3)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)HER3旁通路激活誘導(dǎo)HER2陽性胃癌細(xì)胞耐藥的分子機(jī)制。(4)利

3、用免疫組化法檢測(cè)154例2007-2010年間復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院手術(shù)切除的胃癌原發(fā)灶組織芯片，觀察HER3、p-HER3的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1) HER2陽性胃癌細(xì)胞NCI-N87、SNU-216以及乳腺癌細(xì)胞SKBR3的HER3、p-HER3受體表達(dá)明顯上調(diào)。應(yīng)用細(xì)胞因子NRG1激活HER3受體，顯著增加拉帕替尼耐藥克隆的出現(xiàn)(P＜0.0001)，利用AZD8931逆轉(zhuǎn)NRG1誘導(dǎo)的拉帕替尼耐藥。(2)拉帕替尼和AZD8

4、931對(duì)胃癌細(xì)胞株NCI-N87的生長抑制作用呈劑量依賴性，兩藥呈協(xié)同作用(P＜0.001)。利用siRNA沉默HER3基因，與scrambled siRNA陰性對(duì)照相比，顯著增加了拉帕替尼對(duì)HER2陽性腫瘤細(xì)胞殺傷作用(P＜0.001)。(3)蛋白印跡顯示拉帕替尼可以明顯下調(diào)HER2陽性腫瘤細(xì)胞p-HER2、P-Akt、p-Erk蛋白的表達(dá)水平，而對(duì)EGFR、p-HER3以及非磷酸化的EGFR、HER2、HER3、Akt、Erk蛋白無

5、明顯影響。在胃癌細(xì)胞系中，與拉帕替尼相反，HER3激活劑NRG1可以明顯上調(diào)HER2陽性細(xì)胞p-HER3、p-Akt蛋白的表達(dá)，在乳腺癌細(xì)胞SKBR3中同時(shí)上調(diào)p-Erk的蛋白表達(dá)水平。高劑量的AZD8931聯(lián)合或不聯(lián)合拉帕替尼，p-HER3、p-Akt蛋白的表達(dá)水平下調(diào)更明顯，SKBR3細(xì)胞中同時(shí)伴有p-Erk明顯下調(diào)。(4) HER2陽性胃癌組織中HER3、p-HER3的表達(dá)明顯高于HER2陰性組織(P＜0.0001)，HER3、p